一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102370695A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102370695A(43)申请公布日2012.03.14(21)申请号201010257757.0A61K131/00(2006.01)(22)申请日2010.08.19(71)申请人黑龙江省中医研究院地址150036黑龙江省哈尔滨市香坊区三辅街142号(72)发明人王伟明初东君段玉敏曹贵阳张洪娟(74)专利代理机构北京太兆天元知识产权代理有限责任公司11108代理人张韬(51)Int.Cl.A61K36/52(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P29/00(2006.01)A61P37/04(2006.01)权利要求书2页说明书11页(54)发明名称一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途(57)摘要本发明涉及一种中药活性提取物及其制备方法和用途，特别涉及一种从中药青龙衣中提取的有效部位及其制备方法和用途。本发明所述青龙衣活性提取物可以采用乙醇渗漉、回流、超声波提取或CO2超临界提取，再经过醇沉、洗脱、截留、回流、浓缩、干燥等步骤制得。本发明以青龙衣活性提取物的抗癌活性为指标，对青龙衣的有效部位进行了筛选，以不同含量提取物进行药效试验，结果证实本发明所述青龙衣活性提取物中治疗癌症的有效组分主要为总萘醌类；药效试验结果表明其消炎止痛的有效组分主要为总黄酮、总鞣质及极性小分子类；提高免疫功能作用的物质主要为多糖。CN10237695ACN102370695A权利要求书1/2页1.一种青龙衣活性提取物，其特征在于该青龙衣活性提取物为青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物A’、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C、青龙衣提取物C’、青龙衣活性提取物1、2、3、4中的任意一种；其中，青龙衣活性提取物1、2、3、4中，总黄酮、总萘醌、总鞣质三者之和的含量不少于20％，且多糖含量不少于30％；该青龙衣活性提取物由如下方法制成：(1)取适量青龙衣粉碎，加4～12重量倍30～95％的乙醇进行渗漉提取；提取液备用，提取后的药渣挥散溶剂备用；取提取液于60℃以下减压回收乙醇得清膏，即得青龙衣醇提粗提物；或取适量青龙衣粉碎，过20目筛，以0.5～2重量倍30～100％的乙醇为夹带剂，用CO2超临界提取，具体参数为：萃取釜温度40～55℃，萃取压力20～35MPa，流速15～45L/h，提取时间1～4小时，分离釜1：温度35～45℃，分离压力8～15MPa，分离釜2：温度30～35℃，分离压力5～7MPa；提取后的药渣挥散溶剂备用；提取液于60℃以下减压回收乙醇，制得青龙衣CO2超临界萃取物A；或取适量青龙衣粉碎，过20目筛，不加夹带剂，用CO2超临界提取，具体参数为：萃取釜温度40～55℃，萃取压力20～35MPa，流速15～45L/h，提取时间1～4小时，分离釜1：温度35～45℃，分离压力8～15MPa，分离釜2：温度30～35℃，分离压力5～7MPa；提取后的药渣挥散溶剂备用；将萃取液干燥，制得青龙衣CO2超临界萃取物A；(2)取(1)中挥散溶剂的备用药渣，加4～12倍水煎或超声波提取1～3次，每次0.5～3小时，合并水提液，浓缩成相对密度为1.06～1.30的清膏，加乙醇使含醇量达50～90％，于4～8℃放置12～48小时，取出滤过，滤液备用，沉淀物备用；同法可进行二次醇沉，得滤液合并备用，沉淀物备用；(3)将(1)中所得青龙衣醇提粗提物或青龙衣CO2超临界萃取物A水溶解或拌少量树脂并干燥，上样，过大孔吸附树脂柱，具体步骤为：先用水和/或5～20％的乙醇溶液洗脱，至洗脱液基本无色，将水或低浓度的乙醇弃去，再用50～95％的乙醇洗脱至洗脱液无色，收集该洗脱液，回收乙醇，将其干燥，即得青龙衣提取物A’；(4)将(2)中备用滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物B；(5)将(2)中备用沉淀物分别用适量的95％的乙醇、丙酮、乙醚中的一种或几种洗脱，抽干得多糖粗提物，将其加水溶解，滤过，再将滤液超滤，截留5000～200000分子量的化合物，加0.5～4％活性炭脱色，回流0.5～1.5小时，滤过，滤液浓缩，干燥，即得青龙衣提取物C；(6)将(5)中所述截留5000～200000分子量的化合物替换为截留30000～100000分子量的化合物，即得青龙衣提取物C’；将上述步骤(1)、(4)、(5)制得的青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物1；或将上述步骤(3)、(4)、(5)制得的青龙衣提取物A’、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C混合即得青龙衣活性提取物2；或将上述步骤(1)、(4)、(6)制得的青龙衣CO2超临界萃取物A、青龙衣提取物B、青龙衣提取物C’混合即得青龙衣活性提取物3；2CN10