牛膝活性提取物及其制备方法与用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104083420104083420A(43)申请公布日2014.10.08(21)申请号201310108655.6(22)申请日2013.04.01(71)申请人南通大学地址226019江苏省南通市啬园路9号(72)发明人丁斐顾晓松杨宇民袁颖姚登兵程琼于舒汤欣(74)专利代理机构南京知识律师事务所32207代理人汪旭东(51)Int.Cl.A61K36/21(2006.01)A61P25/02(2006.01)A61P9/10(2006.01)A61P25/28(2006.01)A61P39/06(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书7页说明书7页附图11页附图11页(54)发明名称牛膝活性提取物及其制备方法与用途(57)摘要本发明公开了一种牛膝活性提取物，采用如下方法制备得到，步骤包括：（1）牛膝活性粗提物的制备将单味药材怀牛膝饮片粉碎，水煮浸提，将浸提液用硫酸铵分级沉淀，将沉淀透析除盐得到牛膝活性肽粗提物；（2）牛膝活性提取物的HPLC分离：使用C18制备柱进行梯度洗脱。本发明牛膝活性提取物药材来源单一，制备方法先进，工艺合理，制剂成分明确，安全性高，药理作用显著，可用于研发治疗周围神经损伤、脑血管意外（出血性中风）、缺血性脑损伤（缺血性中风）、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤等中枢神经损伤疾病、抗衰老、防治神经退行性变疾病的药物和保健品。CN104083420ACN104832ACN104083420A权利要求书1/1页1.一种牛膝活性提取物，其特征在于采用如下方法制备得到，步骤包括：（1）牛膝活性粗提物的制备：将单味药材怀牛膝饮片粉碎，水煮浸提，将浸提液用硫酸铵分级沉淀，将沉淀透析除盐得到牛膝活性肽粗提物；（2）牛膝活性提取物的HPLC分离：使用C18制备柱，流动相A为含有0.1%TFA的H2O，流动相B为含有0.1%TFA的CH3CN，梯度洗脱条件为：0min：80%流动相A，20%流动相B；30min：47%流动相A，53%流动相B；31min：100%流动相B，收集保留时间23.35min的组分。2.如权利要求1所述牛膝活性提取物，其特征在于步骤（1）使用饱和度为50%和80%的硫酸铵盐溶液进行分级沉淀。3.如权利要求1或2所述牛膝活性提取物在制备治疗周围神经损伤和脑血管意外、缺血性脑损伤、脑创伤、视神经损伤、脊髓损伤、中枢神经损伤及抗衰老、防治神经退行性变疾病的药物和保健品中的应用。2CN104083420A说明书1/7页牛膝活性提取物及其制备方法与用途技术领域[0001]本发明属于天然药物领域，具体涉及一种牛膝活性提取物及其用途。背景技术[0002]随着现代社会的发展，人口老龄化、交通意外伤害、自然灾害、战争等因素，使得神经损伤及神经系统退行性变疾病的发生率呈显著上升趋势，寻找促进损伤神经修复和再生、预防和治疗神经系统退行性变的有效药物，是当今医药研究中引人关注的课题。[0003]传统药物中的植物药具有疗效确切、毒副作用小的优点，引起国内外医药界的研究兴趣，具有开发利用的广阔前景。一些植物药在治疗神经损伤、神经退行性疾病已有较多的临床报道，近年来也相继从天然药物中提取出具有神经营养或神经保护作用的有效成分。目前，分离鉴定的肽类化合物大多为动物来源，如胰岛素、脑活素、生长激素释放抑制素、多肽疫苗等，与生命活动许多环节密切相关。从植物中分离鉴定出的生物活性多肽相对较少，主要为植物寡肽、小肽、环肽、环肽生物碱、糖肽等，目前对一些重要寡肽的药理学作用研究方向主要包括抗肿瘤、抗AIDS病毒、抗菌、心血管活性和神经活性等方面。随着多肽蛋白质研究的不断深入，多肽的生物活性日益受到重视，而随着现代分离技术的不断发展，越来越多的植物多肽被分离鉴定，但迄今为止对于植物活性肽成分促神经生长、再生或发挥神经保护作用的研究还为数较少，在临床上可有效促进神经再生修复、防治神经退行性变的植物来源的肽类新药也不多见，尚不能满足临床患者的需要。[0004]牛膝（AchyranthesbidentataBl.）为苋科牛膝属植物，常用其根入药，味苦、甘、酸，性平，归肝、肾经，能活血通经、补肝肾、强筋骨、利水通淋、引火下行，可用于腰膝酸痛、筋骨无力、肝阳眩晕等证。牛膝含多糖、皂苷、甾酮、甾醇、香豆素和生物碱等成分，另外还含有少量挥发油、无机盐和氨基酸（多肽或蛋白质）。目前对牛膝提取物在防治神经损伤的研究均为牛膝粗提物。申请号为CN200710019780.4，发明名称为“中药牛膝提取物及制备方法和用途”的中国专利公开了一种中药牛膝提取物及制备方法和用途，包括将单味药材怀牛膝饮片，用0～95％乙醇水溶液提取1～3次，合并提取液，经凝胶柱层