一种转基因成分超灵敏检测探针和引物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103352075A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103352075103352075A(43)申请公布日2013.10.16(21)申请号201310233912.9(22)申请日2013.06.13(71)申请人深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心地址518045广东省深圳市福强路1011号(72)发明人凌杏园章桂明娄定风潘广陈枝楠康林程颖慧叶奕优向才玉龙海冯建军陈菲(74)专利代理机构深圳鼎合诚知识产权代理有限公司44281代理人彭家恩彭愿洁(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书8页说明书8页C12N15/11(2006.01)序列表3页序列表3页附图3页附图3页(54)发明名称一种转基因成分超灵敏检测探针和引物(57)摘要本申请公开了一种动物产品中饲料转基因成分残留检测方法和试剂，该检测方法包括针对靶标转基因设计实时荧光PCR引物和探针，然后采用引物和探针对靶标转基因进行实时荧光PCR检测，其中，探针的序列中具有至少一个锁核酸，锁核酸选自A、C、G、T、U和mC中的至少一种。本申请的检测方法和检测试剂，特别适于高降解的短小的核苷酸片段检测，从而能够很好适用于动物肉制品、奶制品等动物产品中的含量低、高降解的转基因残留成分检测，提高了动物产品中饲料转基因成分残留检测的效率，减小了漏检的概率，为动物产品中的饲料转基因成分残留检测提供了一种新的检测方法和检测试剂，特别适合于口岸检验检疫等部门使用；具有很好的商业价值。CN103352075ACN103527ACN103352075A权利要求书1/2页1.一种用于转基因成分检测的探针试剂，所述探针试剂的序列中其5’端和3’端分别标记有荧光发光基团和荧光淬灭基团，其特征在于：所述探针试剂的序列长度为10～20bp，所述探针的序列中具有至少一个锁核酸，所述锁核酸选自A、C、G、T、U和mC中的至少一种。2.根据权利要求1所述的探针试剂，其特征在于：所述探针试剂包括检测转基因CaMV35S的探针、检测转基因NOS的探针和检测转基因FMV35S的探针中的至少一条。3.根据权利要求2所述的探针试剂，其特征在于：所述检测转基因CaMV35S的探针具有SeqIDNo.3所示序列，所述检测转基因NOS的探针具有SeqIDNo.6所示序列，所述检测转基因FMV35S的探针具有SeqIDNo.9所示序列。4.根据权利要求3所述的探针试剂，其特征在于：SeqIDNo.3所示序列的检测转基因CaMV35S的探针中，第8位的碱基“A”、第11位的碱基“C”和第14位的碱基“G”均为锁核酸；SeqIDNo.6所示序列的检测转基因NOS的探针中，第6位的碱基“G”和第13位的碱基“A”均为锁核酸；SeqIDNo.9所示序列的检测转基因FMV35S的探针中，第6位的碱基“A”、第10位的碱基“G”和第14位的碱基“T”均为锁核酸。5.一种与权利要求3或4所述的探针试剂配合用于转基因成分检测的引物试剂，其特征在于：所述引物试剂包括检测转基因CaMV35S的引物组、检测转基因NOS的引物组和检测转基因FMV35S的引物组中的至少一组；所述检测转基因CaMV35S的引物组具有SeqIDNo.1所示序列和SeqIDNo.2所示序列，所述检测转基因NOS的引物组具有SeqIDNo.4所示序列和SeqIDNo.5所示序列，所述检测转基因FMV35S的引物组具有SeqIDNo.7所示序列和SeqIDNo.8所示序列。6.一种转基因成分的检测方法，包括针对靶标转基因设计实时荧光PCR引物和探针，然后采用所述引物和探针对靶标转基因进行实时荧光PCR检测，其特征在于：所述探针的序列中具有至少一个锁核酸，所述锁核酸选自A、C、G、T、U和mC中的至少一种。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述靶标转基因包括CaMV35S、NOS和FMV35S中的至少一种。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：检测靶标转基因CaMV35S的引物为SeqIDNo.1所示序列和SeqIDNo.2所示序列，探针为SeqIDNo.3所示序列；检测靶标转基因NOS的引物为SeqIDNo.4所示序列和SeqIDNo.5所示序列，探针为SeqIDNo.6所示序列；检测靶标转基因FMV35S的引物为SeqIDNo.7所示序列和SeqIDNo.8所示序列，探针为SeqIDNo.9所示序列。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：SeqIDNo.3所示序列的探针中，第8位的碱基“A”、第11位的碱基“C”和第14位的碱基“G”均为锁核酸；SeqIDNo.6所示序列的探针中，第6位的碱基“G”和第13位的碱基“A