一种引物探针组合物及检测方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111118140A(43)申请公布日2020.05.08(21)申请号202010031581.0(22)申请日2020.01.13(71)申请人首都医科大学宣武医院地址100053北京市西城区长椿街45号(72)发明人蔡燕宁张陆明(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人宋秀兰(51)Int.Cl.C12Q1/6883(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书11页序列表2页附图3页(54)发明名称一种引物探针组合物及检测方法和用途(57)摘要本发明涉及生物技术技术领域，具体涉及一种引物探针组合物及检测方法和用途，所述引物的核苷酸序列包括SEQIDNO.1-2和SEQIDNO.7-8中的至少两种，所述探针的核苷酸序列包括SEQIDNO.3-6和SEQIDNO.9-12中的至少两种，所述引物探针组合物可用于检测SNCA基因DNA甲基化水平，用于制备诊断或监测帕金森病及其相关疾病发生发展的产品。本发明具有成本低，操作简单的优点，提高了检测的效率，在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析，杜绝了普通PCR开放检测对环境和样本的污染，并且可定量分析SNCA基因DNA甲基化水平。CN111118140ACN111118140A权利要求书1/2页1.一种引物探针组合物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列包括：SEQIDNO.1-2和SEQIDNO.7-8中的至少两种，所述探针的核苷酸序列包括：SEQIDNO.3-6和SEQIDNO.9-12中的至少两种。2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括：SEQIDNO.1-4组合，SEQIDNO.1-2和SEQIDNO.5-6组合，SEQIDNO.7-10组合，SEQIDNO.7-8和SEQIDNO.11-12组合中的至少一个组合。3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，所述探针的3’端标记有淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团为FAM、HEX、VIC、JOE和ROX中的至少一种，所述淬灭基团为NFQ-MGB基团。4.根据权利要求3所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括：1)用于CpG岛位置1甲基化水平检测的引物探针组合：SEQIDNO.1：5’-ATGAAATGGAAGTGTAAGGAGG-3’，SEQIDNO.2：5’-ACCCTCAACTATCTACCCTAAAC-3’，SEQIDNO.3：5’-CTTATTAACCCGTTACC-3’，SEQIDNO.4：5’-TATTAACCCATTACCAC-3’；2)用于CpG岛位置2甲基化水平检测的引物探针组合：引物：SEQIDNO.1：5’-ATGAAATGGAAGTGTAAGGAGG-3’，SEQIDNO.2：5’-ACCCTCAACTATCTACCCTAAAC-3’，SEQIDNO.5：5’-TCACACTCGCGAAC-3’，SEQIDNO.6：5’-CTCACACTCACAAACC-3’；3)用于CpG岛位置3甲基化水平检测的引物探针组合：SEQIDNO.7：5’-GTGTAAGGAGGTTAAGTTAATAGGT-3’，SEQIDNO.8：5’-CCCACCCTCAACTATCTACC-3’，SEQIDNO.9：5’-CCCGCGCCAACAC-3’，SEQIDNO.10：5’-CCCACACCAACACT-3’；4)用于CpG岛位置4甲基化水平检测的引物探针组合：SEQIDNO.7：5’-GTGTAAGGAGGTTAAGTTAATAGGT-3’，SEQIDNO.8：5’-CCCACCCTCAACTATCTACC-3’，SEQIDNO.11：5’-AACGCCGCTCACA-3’，SEQIDNO.12：5’-AACACCACTCACACTC-3’；所述位置1-4在4号染色体SNCA基因启动子或第一外显子区域。5.权利要求1-4任意一项所述的引物探针组合物在制备用于检测SNCA基因DNA甲基化水平的产品中的应用。6.权利要求1-4任意一项所述的引物探针组合物在制备用于诊断或监测帕金森病及其相关疾病的产品中的应用。7.一种检测SNCA基因DNA甲基化水平的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物。8.一种检测帕金森病及其相关疾病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物。2CN111118140A权利要求书2/2页9.一种利用权利要求1-4任一项所述的引物探针组合物检测SNCA基因DNA甲基化水平的方法，其特征在于，包括如下