青霉素结合蛋白Bt‑pbp2X及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106085982A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610697616.8C12Q1/48(2006.01)(22)申请日2016.08.18(71)申请人武汉职业技术学院地址430074湖北省武汉市洪山区关山大道463号(72)发明人鞠守勇陈其国朱虹翼徐顺高王超(74)专利代理机构北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙)11498代理人王加岭杨静(51)Int.Cl.C12N9/10(2006.01)C12N15/54(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表9页附图2页(54)发明名称青霉素结合蛋白Bt-pbp2X及其应用(57)摘要本发明提供了一种新型的青霉素结合蛋白Bt-pbp2X及其编码基因，所述蛋白具有SEQIDNo.2所示的氨基酸序列，或SEQIDNo.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸且具有同等活性的蛋白。本发明的蛋白质可以用于制备青霉素类抗生素检测试剂，应用于青霉素类抗生素残留的快速检测，其不需要复杂的仪器设备，样品前处理过程非常的简单，并且对于检测人员技术及知识水平有特定要求，非常适于现场快速检测。CN106085982ACN106085982A权利要求书1/1页1.一种与青霉素类抗生素结合的蛋白质，其氨基酸序列是：1)SEQIDNo.2所示的氨基酸序列；或2)SEQIDNo.2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸且具有同等活性的蛋白。2.编码权利要求1所述蛋白的基因。3.如权利要求2所述的基因，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。4.含有权利要求2或3所述基因的表达载体。5.由权利要求4所述表达载体转化的宿主细胞。6.如权利要求5所述的宿主细胞，其为大肠杆菌。7.含有权利要求所述蛋白的检测试剂。8.权利要求1所述蛋白在检测青霉素残留中的应用。9.一种检测青霉素类抗生素残留的方法，其是用权利要求1所述蛋白与样品中的青霉素相结合，并检测结合的结果。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，将所述蛋白与标准品中的青霉素结合，并建立标准曲线，根据标准曲线确定样品中青霉素的含量。2CN106085982A说明书1/6页青霉素结合蛋白Bt-pbp2X及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种青霉素结合蛋白及其应用。背景技术[0002]随着我国大众生活水平的不断提高，人们对食品安全的关注度越来越高，食品中抗生素过量残留的问题已经引起人们的强烈反响。β-内酰胺类抗生素指其分子结构中含有β-内酰胺环的一大类抗生素，包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类、碳青霉烯和青霉烯类酶抑制剂等，以及新发展的头霉素类、硫霉素类、单环β-内酰胺类等其他非典型β-内酰胺类抗生素。它是现有在食品中添加的抗生素中使用最普及的一类。长期摄入β-内酰胺类抗生素过量残留的食品将严重导致人们身体健康，抗生素过量残留能破坏胃肠道等菌群的平衡，引起长期的腹泻、维生素缺乏及影响其他治疗药物的疗效；摄入β-内酰胺类抗生素过量残留的食品会导致一部分人群的过敏反应，较轻者表现为荨麻疹、发热、关节肿痛及蜂窝组织炎等病症，严重时可引起喉头水肿、呼吸困难、过敏性休克，甚至危及生命的危害；长期摄入抗生素过量残留的食品会增强体内细菌对人体的耐药性，以至于出现预想的超级细菌，当人体出现疾病时，可增加治疗难度甚至导致治疗失效。[0003]随着乳品中抗生素残留问题的日益严峻，我国对乳品质量的监管也日趋严格，2007年我国通过了《生鲜乳品收购标准修正案》，其中明确将抗生素残留检验列为强制检测项目并明确制定了各类抗生素在牛乳中的最高残留限量。[0004]目前，国内乳品行业广泛应用的牛乳中青霉素残留的检测方法主要依据国标GB4789.27-94《鲜乳中抗生素残留量检测方法》进行，包括试管法和平板法。商检系统的行业标准检测方法为杯碟法。尽管微生物法在基层单位使用广泛，但该法的精确度、准确度都不够高，且检测过程烦琐，耗时较长，不易筛选到敏感菌株，易受其它抗菌药物的影响，根本无法适应牛乳抗生素残留检测需要。发明内容[0005]本发明的第一个目的在于提供一种青霉素类抗生素结合蛋白。[0006]本发明的第二个目的在于提供编码所述青霉素类抗生素结合蛋白的基因。[0007]本发明的第三个目的在于提供所述蛋白在检测青霉素类抗生素中的应用。[0008]本发明从苏云金芽孢杆菌中得到了一种新型的与青霉素具有高亲和力的蛋白质Bt-pbp2X，该蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，序列全长699个氨基酸，表观分子量为76101.4Da，等电点约为8.80，该蛋白