一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106124683A(43)申请公布日2016.11.16(21)申请号201610741784.2(22)申请日2016.08.26(71)申请人中国兽医药品监察所地址100081北京市海淀区中关村南大街8号(72)发明人于晓辉万仁玲杨秀玉张广川马秋冉张璐董玲玲韩宁宁杨星赵富华(74)专利代理机构北京尚诚知识产权代理有限公司11322代理人鲁兵郭凡(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图9页(54)发明名称一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法(57)摘要本发明公开了一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法，包括制备对照储备液、制备样品溶液、UPLC-PDA检测和比对图谱。本发明利用UPLC法联合PDA法建立了一种能够同时分离、并测定兽药中22种磺胺类药物和9种喹诺酮类药物的检测方法。本发明方法既可以定性，也可以定量测定，通过与对照色谱图中的保留时间和光谱图中峰型的比较，可对其中的药物成分进行定性，在此基础上，通过外标法对药物成分进行定量检测。本发明提出的检测方法操作简便、快速、准确，适用范围宽、设备造价低廉、同时检出的目标化合物多，可以作为兽药制剂中非法添加物的检查方法，为规范兽药市场提供了技术保障，为兽药市场的监管提供了技术支持。CN106124683ACN106124683A权利要求书1/1页1.一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)、制备对照储备液：分别将多种抗菌成分用溶剂A配制成浓度均为1mg/ml的对照储备液；步骤2)、制备样品溶液：称取兽药样品，用溶剂A配制成样品溶液；步骤3)、UPLC-PDA检测：分别将步骤1)得到的对照储备液和步骤2)得到的样品溶液注入超高效液相色谱仪(UPLC)，以PDA为检测器进行梯度洗脱程序，得到对照图谱和样品图谱(所述图谱包括色谱图和光谱图)；步骤4)、比对图谱：将步骤3)得到的样品图谱与对照图谱分别进行比对，得出兽药样品中添加的抗菌成分的种类和添加量。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述抗菌成分为磺胺类药物和/或喹诺酮类药物。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述磺胺类药物包括磺胺脒、磺胺、苯磺酰胺、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪钠、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯。4.根据权利要求2或3所述方法，其特征在于，所述喹诺酮类药物包括马波沙星、氧氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星。5.根据权利要求1-4任一所述方法，其特征在于，所述步骤3)UPLC-PDA检测的色谱柱选用AgilentZORBAXSB-C18HD(2.1mm×150mm，1.8μm)；流速：0.2mL/min；柱温：25℃；进样量：1μL。6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤3)UPLC-PDA检测的流动相为：流动相A为0.05％-0.2％(体积百分含量，v/v)甲酸水溶液(pH＝3.35-3.45)，流动相B为乙腈。7.根据权利要求5或6所述方法，其特征在于，所述步骤3)UPLC-PDA检测的梯度洗脱程序分为八个阶段：阶段①：0-7min,9％-14％流动相B；阶段②：7-20min，14％-15.5％流动相B；阶段③：20-25min，15.5％-20％流动相B；阶段④：25-30min，20％-24％流动相B；阶段⑤：30-37min，24％-30％流动相B；阶段⑥：37-39min，30％-50％流动相B；阶段⑦：39-39.5min，50％-9％流动相B；阶段⑧：39.5-42min，9％-9％流动相B。8.根据权利要求1-7任一所述方法，其特征在于，所述步骤4)的比对图谱具体为：先比对样品色谱图与对照色谱图中是否有保留时间相同的峰；如果没有，说明样品中未添加对照图谱对应的抗菌成分，如果有，再进一步比对该保留时间相同的峰在样品光谱图和对照光谱图中的整体峰型、最大吸收波长是否一致，如果一致，则判断样品中含有对照图谱对应的抗菌成分，得到样品中添加的抗菌成分的种类，如果不一致，则判断样品中不含有对照图谱对应的抗菌成分；进一步计算样品色谱图中该峰的峰面积，得到该抗菌成分的添加量。9.根据权利要求1-8任一所述方法，其特征在于，所述溶剂A为乙腈与0.1％(体积百分含量，v/v)甲酸水溶液的混合液，其中，乙腈：0.1％甲酸水溶液的体积比为(40:60)-(70:30)。10.根据权利要求1-9任一所述方