一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114200053A(43)申请公布日2022.03.18(21)申请号202111508915.X(22)申请日2021.12.10(71)申请人碳元复兴（厦门）科技有限公司地址361000福建省厦门市思明区龙虎南里36号418室(72)发明人洪家俊王倩马晓霞(74)专利代理机构厦门荔信律和知识产权代理有限公司35282代理人杨光(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/08(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图1页(54)发明名称一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法(57)摘要本发明属于环境检测技术领域，公开了一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，包括样品前处理、混合标准溶液配制及样品检测。本发明基于LC‑MS/MS，通过优化样品前处理和实验仪器参数，建立了检测方法。通过特定的样品前处理，本发明方法具有操作简便、净化效果强、基质效应低等优势；本发明中所有检测项目在线性范围内的相关系数r2均大于0.99，具有良好的线性关系，具有高灵敏性的优势；并且根据不同化合物的极性差别，通过分组采用正负离子扫描模式，可一次性实现17大类79种兽药的同时分析，具有高通量的优势；本发明提供的检测方法为人体健康监督管理提供了技术保障。CN114200053ACN114200053A权利要求书1/2页1.一种沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，其特征在于，所述多种类兽药包括磺胺类、喹诺酮类、β‑受体激动剂、大环内酯类、四环素类、β‑内酰胺类、工业染料类、雄激素类、硝基呋喃及其代谢物类、雌激素类、氯霉素类、乙胺嘧啶、喹乙醇、卡巴氧、螺旋霉素、玉米赤酶醇和尼卡巴嗪共17类79种兽药；该检测方法包括以下步骤：(1)样品前处理将HLB柱依次用甲醇和超纯水进行活化，得到活性HLB柱；将新鲜沼液高速离心后用0.1～0.3μm水系滤膜过滤，之后将所得澄清沼液采用超纯水稀释，得到稀释沼液样品；于稀释沼液样品中加入Na2EDTA后摇匀，以4～6mL/min的流速通过活性HLB柱进行上样；上样结束后用甲醇‑水进行淋洗，淋洗结束并抽干后依次用甲醇、甲醇‑二氯甲烷进行洗脱；将所得洗脱液在35～45℃下氮吹至干后进行定容，最后经0.1～0.3μm有机滤膜过滤得到待测样品溶液，待LC‑MS/MS检测；其中，所述活性HLB柱中填料干重和柱内体积与新鲜沼液的比例为(0.5～1)g:(6～20)mL:2mL，所述稀释沼液样品的稀释比例为100～200倍；(2)混合标准溶液配制将17类79种兽药标准品配制成0.02～500μg/L系列梯度的混合标准溶液，‑25℃～‑18℃下避光保存；将10种替代物标准品混合配制成1mg/mL的混合标准溶液，‑25℃～‑18℃下避光保存；(3)样品检测将兽药标准品和替代物标准品的混合标准溶液进行LC‑MS/MS测定，得到标准工作曲线；将待测样品溶液进行LC‑MS/MS测定，采用外标法定量，将所得检测曲线与标准工作曲线进行比对，得到待测样品溶液中各种类兽药的种类及含量。2.根据权利要求1所述的沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，其特征在于，步骤(1)中，相对于2mL沼液，所述Na2EDTA的用量为0.1～0.2g。3.根据权利要求1所述的沼液中多种类兽药残留的同时检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述79种兽药标准品包括：磺胺类：磺胺甲恶唑、胺甲噻二唑、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺喹恶啉、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲基异嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲异恶唑、磺胺硝苯、磺胺甲氧哒嗪；喹诺酮类：环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、达氟沙星、氟甲喹、麻保沙星、沙拉沙星、恶喹酸；β‑受体激动剂：莱克多巴胺、克伦特罗、特步他林、沙丁胺醇、西马特罗、非诺特罗、氯丙那林、妥布特罗、喷布特罗；大环内酯类：红霉素、泰乐菌素、替米考星、林可霉素；四环素类：土霉素、金霉素、四环素、强力霉素；β‑内酰胺类：阿莫西林、头孢噻呋、青霉素G、双氯青霉素、苯唑青霉素、氯唑青霉素、氨苄青霉素；工业染料类：结晶紫、隐性结晶紫、隐性孔雀石绿、孔雀石绿；雄激素类：甲基睾丸酮、丙酸睾丸酮；硝基呋喃及其代谢物类：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林、NP‑AOZ、NP‑AMOZ、NP‑AHD、NP‑SCA；雌激素类：己烯雌酚、雌三醇、雌二醇、己烷雌酚、双烯雌酚、氯地孕酮；氯霉素类：氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素；其他类：乙胺嘧啶、喹乙醇、卡巴氧、螺旋霉素、玉米赤酶醇、尼卡巴嗪。4.根据权利要求1所述的沼液中多种类兽药残留的同时检测