分离多聚(A)核酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106459965A(43)申请公布日2017.02.22(21)申请号201580023578.1(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司3126(22)申请日2015.04.286代理人陈详马思敏(30)优先权数据14166712.12014.04.30EP(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2016.10.31(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2015/0591172015.04.28(87)PCT国际申请的公布数据WO2015/165859EN2015.11.05(71)申请人凯杰有限公司地址德国希尔登(72)发明人G·克里斯托费尔M·施伦普博格D·奥尼尔权利要求书4页说明书29页附图5页(54)发明名称分离多聚(A)核酸的方法(57)摘要本发明尤其涉及一种从含有核酸的样品中分离具有单链多聚(A)延伸段的多聚(A)核酸的方法，包括：(a)提供杂交组合物，其包含：i)含有核酸的样品；ii)杂交溶液，其包含：aa.钠盐；bb.季铵盐；其中杂交溶液的组分可以作为单一溶液加入到样品中或者可以以任何顺序分别加入到样品中；iii)能够与多聚(A)核酸的多聚(A)延伸段杂交的捕获探针；和将所述杂交组合物在所述多聚(A)核酸和所述捕获探针之间形成核酸杂交体的条件下进行孵育；(b)将形成的杂交体与剩余的样品分离。所述方法特别适用于从不同样品中有效地分离多聚(A)RNA，同时避免了不需要的非多聚(A)核酸(例如rRNA)的残留。本发明还提供了有益的方法、杂交溶液和试剂盒。CN106459965ACN106459965A权利要求书1/4页1.一种从含有核酸的样品中分离具有单链多聚(A)延伸段的多聚(A)核酸的方法，包括：(a)提供杂交组合物，其包含：i)含有核酸的样品；ii)杂交溶液，其包含：aa.钠盐；bb.季铵盐；其中杂交溶液的组分可以作为单一溶液加入到样品中或者可以以任何顺序分别加入到样品中；iii)能够与多聚(A)核酸的多聚(A)延伸段杂交的捕获探针；和将所述杂交组合物在所述多聚(A)核酸和所述捕获探针之间形成核酸杂交体的条件下进行孵育；(b)将形成的杂交体与剩余的样品分离。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，a)所述杂交组合物包含浓度≤250mM的杂交溶液钠盐，优选地，浓度选自：25mM-250mM、35mM-200mM、40mM-175mM、50mM-150mM、55mM-125mM、60mM-115mM和60mM-100mM；和/或b)所述杂交溶液包含浓度≤500mM的钠盐，优选地，浓度选自：50mM-500mM、75mM-400mM、85mM-350mM、100mM-300mM、115mM-250mM、120mM-225mM和125mM-200mM。3.如权利要求1或2所述的方法，所述季铵盐是四烷基铵盐，优选地，选自四甲基铵盐(TMA)和四乙基铵盐(TEA)。4.如权利要求3所述的方法，具有一种或多种以下特征：a)所述杂交组合物含有的杂交溶液四烷基铵盐浓度≤1.5M，优选地，浓度选自0.1M-1.75M、0.125M-1.5M、0.25M-1.25M、0.375M-1M和0.375M-0.75M；和/或b)所述杂交溶液含有的四烷基铵盐浓度≤3M，优选地，浓度选自0.2M-2.5M、0.5M-2M和0.75M-1.5M；和/或c)所述四烷基季铵盐选自下组：四乙基氯化铵(TEAC)、四甲基氯化铵(TMAC)、四甲基硝酸铵(TMAN)、四乙基溴化铵(TEAB)和四甲基溴化铵(TMAB)；和/或d)其中，所述四烷基铵盐优选为四甲基溴化铵。5.如权利要求1-4所述的一种或多种方法，包括：(a)提供杂交组合物，其包含：i)含有核酸的样品；ii)杂交溶液，其包含：aa.钠盐，浓度≤500mM；bb.作为季铵盐的四烷基铵盐；其中杂交溶液的组分可以作为单一溶液加入到样品中或者可以以任何顺序分别加入到样品中；iii)能够与多聚(A)核酸的多聚(A)延伸段杂交的捕获探针；其中所述杂交组合物含有的杂交溶液钠盐的浓度≤250mM，和将所述杂交组合物在所述多聚(A)核酸和所述捕获探针之间形成核酸杂交体的条件下进行孵育；2CN106459965A权利要求书2/4页(b)将形成的杂交体与剩余的样品分离。6.如权利要求1-5所述的一种或多种方法，包括(a)提供杂交组合物，其包含：i)含有核酸的样品；ii)杂交溶液，其包含：aa.钠盐，浓度选自50mM-350mM、75mM-300mM、100mM-250mM和125mM-200mM；bb.作为季铵盐的四烷基铵盐，浓度选自0.2M-2.5M、0.5M-2M