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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106483300A(43)申请公布日2017.03.08(21)申请号201610919202.5G01N33/558(2006.01)(22)申请日2016.10.21(83)生物保藏信息CCTCCNO:C20161402016.07.31(71)申请人河北省科学院生物研究所地址050051河北省石家庄市友谊南大街46号2号楼509(72)发明人郝少彦李春生刘静静李玉静吴萌杜顺丰武孝利曹秀梅闫玉杰(74)专利代理机构河北东尚律师事务所13124代理人李国聪(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/577(2006.01)权利要求书3页说明书7页附图2页(54)发明名称一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金层析试纸条及其制备方法与应用,属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。该试纸条结构包括底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫,试纸条两端设有保护膜,所述样品垫、胶体金垫、包被膜、吸水垫依次粘贴于底板上;胶体金垫上包被有胶体金标记的能识别呋喃唑酮代谢物的单克隆抗体;包被膜上设有偶联呋喃唑酮代谢物的载体蛋白溶液印制的隐形检测线,以及用羊抗小鼠IgG溶液印制的隐形质控线。本发明的胶体金层析检测试纸条具有便捷、快速、直观、时效性强等特点,适用范围广,成本低便于推广应用。CN106483300ACN106483300A权利要求书1/3页1.一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条,其特征在于,该检测试纸条由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成,试纸两端设有保护膜;所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫依次粘贴于底板上;其中胶体金垫为吸附有胶体金标记的呋喃唑酮代谢物单克隆抗体,包被膜上含有用呋喃唑酮代谢物偶联载体蛋白的预包被检测线T线,用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液预包被的质控线C线,两条线竖直平行排列。2.根据权利要求1所述的胶体金层析试纸条,其特征在于,所述底板为PVC条或其它不吸水的硬质材料;所述样品垫和胶体金垫由玻璃纤维棉制成;所述吸水垫由吸水滤纸制成;所述包被膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜;所述保护膜为不透明的胶膜。3.根据权利要求1所述的胶体金层析试纸条,其特征在于,所述呋喃唑酮代谢物单克隆抗体为鼠源单克隆抗体,由CCTCCNO:C2016140的杂交瘤细胞株AOZ-4G3产生;该杂交瘤细胞株被命名为杂交瘤细胞株AOZ-4G3,于2016年7月31日送交中国典型培养物保藏中心保藏,保藏号为CCTCCNO:C2016140。4.根据权利要求1所述的胶体金层析试纸条,其特征在于,所述呋喃唑酮代谢物单克隆抗体由呋喃唑酮代谢物抗原产生,该呋喃唑酮代谢物抗原为由呋喃唑酮代谢物与载体蛋白采用碳化二亚胺法合成的偶联物,包括免疫原与检测原;所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清白蛋白、免疫血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白。5.根据权利要求4所述的胶体金层析试纸条,其特征在于,所述呋喃唑酮代谢物免疫原使用牛血清白蛋白为载体;所述呋喃唑酮代谢物检测原使用卵清蛋白为载体。6.制备如权利要求1所述检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备呋喃唑酮代谢物抗原工作液:(a)呋喃唑酮代谢物衍生化:取0.25gAOZ,用2mL左右的甲醇于室温下搅拌使之溶解;取0.15g3-羧基苯甲醛,用2mL甲醇使之溶解,在搅拌下缓慢滴入上述AOZ溶液中,室温下搅拌反应5h,过滤,烘干滤渣即得呋喃唑酮代谢物的衍生物CPAOZ;(b)免疫原的合成:称取50mg的牛血清白蛋白BSA溶于pH值7.4的1mL0.1mol/L的PBS中,加入N,N-二甲基酰胺DMF1mL,搅拌溶解;再将步骤(a)所得的CPAOZ8mg溶于1mLDMF溶液中,搅拌下加入二环己基亚胺DCC14mg和N-羟基琥珀酰亚胺NHS6mg,4℃下密封搅拌过夜,8000r/min离心15分钟,收集上清液装入透析袋中,4℃条件下用pH值7.4的0.01mol/LPBS透析3d,每天换液3-4次,得CPAOZ-BSA溶液;(c)检测原的合成:称取40mg的卵清蛋白OVA溶于pH值7.4的1mL0.1mol/LPBS中,加入N,N-二甲基酰胺DMF1mL,搅拌溶解;再将步骤(a)所得的CPAOZ8mg溶于1mLDMF溶液中,搅拌下加入二环己基亚胺DCC14mg和N-羟基琥珀酰亚胺NHS6mg,4℃下密封搅拌过夜,8000r/min离心15分钟,收集上清液装入透析袋中,4℃条件下用pH值7.4的0.01mol/LPBS透析3d,每天换液3-4次,得CPAOZ-OVA溶