一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106525989A(43)申请公布日2017.03.22(21)申请号201610139153.3(22)申请日2016.03.11(71)申请人湖南汉森制药股份有限公司地址413000湖南省益阳市银城南路龙岭工业园(72)发明人刘令安杨华张妮瑜林俊华张建伟王雄龙郭元满(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱(57)摘要本发明公开了一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱，以及枳壳药材指纹图谱或标准指纹图谱在鉴别枳壳药材中的用途。方法包括：（1）取枳壳药材粉碎成粗粉，精密称定，加入甲醇，进行提取，取续滤液，即得供试品溶液；（2）制备对照品溶液；（3）分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱。本发明的测定方法操作简便，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，专属性强，对于指导生产投料、确保质量可靠具有积极作用，本发明建立的枳壳药材指纹图谱可有效的监控枳壳药材的质量及鉴别其真伪。CN106525989ACN106525989A权利要求书1/1页1.一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取枳壳药材粗粉，精密称定，加入甲醇，超声或回流提取，提取液以微孔膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：分别取芸香柚皮苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、柠檬苦素对照品、川陈皮素对照品、诺米林对照品、橘红素对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；（3）高效液相色谱检测：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得枳壳指纹图谱；其中，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，4.6×250mm，5μm；柱温：20~40℃；检测波长为280nm、215nm，切换时间为0min、24.01min；进样量为10μl；流速：1.0ml/min；分析时间为70min；流动相为流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液；采用梯度洗脱方式：0min→25min→25.01min→35min→60min→70min，乙腈20%→24%→30%→40%→95%→100%。2.根据权利要求1所述的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）的枳壳粗粉与甲醇的比例为0.2g:50ml。3.根据权利要求1所述的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于：所述步骤（1）的超声或回流提取时间为1小时。4.根据权利要求1所述的一种枳壳药材指纹图谱的检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中的对照品溶液具体为：每1ml各含芸香柚皮苷70ng、柚皮苷80ng、橙皮苷40ng、新橙皮苷80ng、柠檬苦素70ng、川陈皮素80ng、诺米林70ng、橘红素60ng的混合溶液。5.一种如权利要求1所述的枳壳指纹图谱的检测方法所建立的枳壳药材的指纹图谱，其特征在于：枳壳指纹图谱中12个色谱峰被确定为共有峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰1为芸香柚皮苷，峰2为柚皮苷，峰3为橙皮苷，峰4为新橙皮苷，峰8为柠檬苦素，峰9为川陈皮素，峰10为诺米林，峰11为橘红素，所述指纹图谱的12个共有指纹峰的相对保留时间范围及相对标准偏差如下：1号峰：0.680～0.692，RSD为0.68%；2号峰：0.789～0.804，RSD为0.92%；3号峰：0.862～0.877，RSD为0.75%；4号峰：1，RSD为0%；5号峰：1.277～1.296，RSD为0.51%；6号峰：1.893～1.924，RSD为0.74%；7号峰：2.322～2.345，RSD为0.65%；8号峰：2.530～2.547，RSD为1.02%；9号峰：2.670～2.696，RSD为0.84%；10号峰：2.765～2.828，RSD为0.34%；11号峰：2.834～2.854，RSD为0.59%；12号峰：3.560～3.571，RSD为0.64%。2CN106525989A说明书1/7页一种枳壳药材指纹图谱的检测方法及标准指纹图谱技术领域[0001]本发明属于药物分析技术领域，特别涉及一种枳壳药材指纹图谱及其建立方法。具体地，本发明涉及一种枳壳药材的高效液相色谱（HPLC）切换波长法指纹图谱及其建立方法，以及枳壳的标准指纹图谱。本发明还涉及一种枳壳药材质量优劣的鉴别方法。背景技术[0002]枳壳为芸香科柑橘属植物酸橙CitrusaurantiumL及其栽培变种的干燥未成熟果实。《中国药典》2015年版收载的栽培变种为黄皮酸橙(Citrusaurantium‘Huan