玄参药材HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107328872A(43)申请公布日2017.11.07(21)申请号201710453807.4(22)申请日2017.06.15(71)申请人中山大学地址510275广东省广州市海珠区新港西路135号(72)发明人高华宏苏薇薇白杨彭维(74)专利代理机构广州番禺容大专利代理事务所(普通合伙)44326代理人刘新年黄开艳(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称玄参药材HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱(57)摘要本发明公开了一种玄参药材HPLC指纹图谱的构建及其质量鉴定方法。该方法包括以下步骤：玄参药材粉末用50％～70％甲醇水溶液超声提取，微孔滤膜滤过作为供试品溶液。取批量供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到玄参HPLC标准指纹图谱，图谱中应呈现4个特征峰，以肉桂酸峰为S峰，相对保留时间的规定值分别为：0.40、0.81、0.92、1.00。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，在规定值的±7％范围之内。相对于现有技术，本发明可全面、准确快速监控玄参药材的质量。具有专属性强、稳定性高、重复性好等优点，尤其适合规模化生产的检测和监控。CN107328872ACN107328872A权利要求书1/1页1.一种玄参药材HPLC指纹图谱构建方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：精密称取玄参药材粉末0.5～5g，按料液比10：100，用50％～70％甲醇水溶液超声提取，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品、肉桂酸对照品适量，加30％甲醇溶解，制成每1ml含哈巴苷60μg、哈巴俄苷23μg、肉桂酸15μg的混合对照品溶液，即得；(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.03％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0min-10min-20min-25min-30min，流动相A:3％-10％-33％-50％-80％；流速1ml/min；检测波长为前15分钟210nm，15分钟后切换波长为278nm；(4)标准指纹图谱的建立：按以上方法对10批以上玄参样品进行HPLC分析，得到相应图谱，将上述图谱输入中药色谱指纹图谱相似度评价软件，匹配主要色谱峰，生成标准指纹图谱，标准指纹图谱包括哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷和肉桂酸四个特征峰。2.一种玄参药材的指纹图谱鉴定方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：精密称取玄参药材粉末0.5～5g，按料液比10：100，用50％～70％甲醇水溶液超声提取，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品、肉桂酸对照品适量，加30％甲醇溶解，制成每1ml含哈巴苷60μg、哈巴俄苷23μg、肉桂酸15μg的混合对照品溶液，即得；(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.03％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0min-10min-20min-25min-30min，流动相A:3％-10％-33％-50％-80％；流速1ml/min；检测波长为前15分钟210nm，15分钟后切换波长为278nm；(4)将供试品图谱输入中药色谱指纹图谱相似度评价软件，匹配主要色谱峰，生成供试品指纹图谱；(5)鉴别：将供试品指纹图谱与权利要求1所述的标准指纹图谱对比，以肉桂酸为参照峰，包括参照峰在内，所得供试品指纹图谱有4个共有特征峰，相对保留时间分别为0.40、0.81、0.92、1.00，各特征峰与参照峰的相对保留时间，为规定值的±7％范围之内。2CN107328872A说明书1/4页玄参药材HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱技术领域[0001]本发明涉及玄参的HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。背景技术[0002]现阶段的中药指纹图谱技术，具有成分明确、可量化的优点，用于鉴别中药材的真伪，评价中药材质量的优劣及监控中药材质量的稳定、均一，对全面、准确、有效地监控中药材质量具有重要意义。[0003]玄参是玄参科植物玄参(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根，具有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效。现有玄参HPLC鉴别方法多采用210nm作为检测波长，检测哈巴苷和哈巴俄苷，本发明用HPLC法构建了玄参的指纹图谱，采用210和278nm切换检测哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷和肉桂酸四个主成分，可全面、快速地监控玄参的质量。发明内容[0004]本发明提供了一种玄参药材HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。[0005]该方法包括以下步骤：[0006](