灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106568960A(43)申请公布日2017.04.19(21)申请号201510656071.1(22)申请日2015.10.13(71)申请人丹阳亿太生物科技发展有限公司地址212009江苏省镇江市丹阳市开发区八纬路留学生创业园(72)发明人洪霞杜霞(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法(57)摘要本发明灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含灭多威单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有灭多威蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测灭多威，方便、快捷、结果准确。CN106568960ACN106568960A权利要求书1/1页1.灭多威胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；(2)抗体的预处理：将要标记的灭多威抗体在1000r/min，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成灭多威单克隆抗体胶体金标记物；(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)灭多威蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含灭多威蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、灭多威蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2.根据权利要求1所述的灭多威胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白(BSA)和0.8g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。2CN106568960A说明书1/3页灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法。背景技术[0002]灭多威是一种广谱性氨基甲酸酯类杀虫剂，具有挥发性强，吸入毒性高等特性,主要用于防治二化螟、飞虱类、斜纹夜蛾等类害虫。原药为白色晶体粉末，商品态为可湿性粉剂、可溶性粉剂或乳油。灭多威为一种内吸性具有触杀、胃毒作用的氨基甲酸酯类的广谱杀虫剂。最先推荐作为杀虫、杀线虫剂。适用于棉花、烟草、果树、蔬菜防治蚜虫、蛾、地老虎等。因此定期对灭多威残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。[0003]现有技术对于灭多威的检测主要是气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。发明内容[0004]针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种灭多威的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检