百菌清的免疫胶体金检测卡及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106568957A(43)申请公布日2017.04.19(21)申请号201510655846.3(22)申请日2015.10.13(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人杜霞杜军刘静(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/558(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称百菌清的免疫胶体金检测卡及其制备方法(57)摘要本发明百菌清的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含百菌清单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有百菌清蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测百菌清，方便、快捷、结果准确。CN106568957ACN106568957A权利要求书1/1页1.百菌清胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；(2)抗体的预处理：将要标记的百菌清抗体在1000r/min，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成百菌清单克隆抗体胶体金标记物；(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)百菌清蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含百菌清蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、百菌清蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2.根据权利要求1所述的百菌清胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白(BSA)和0.8g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。2CN106568957A说明书1/3页百菌清的免疫胶体金检测卡及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及百菌清的免疫胶体金检测卡及其制备方法。背景技术[0002]百菌清是具有高温选择性的水稻田专用除草剂。对水稻安全，杀草谱广。杂草种子在发芽过程中吸收药剂，根部吸收较差。该品为芽前除草剂，主要用于防除禾本科杂草。产品属2-氯化乙酰替苯胺类除草剂，是细胞分裂抑制剂，用于土壤处理可防除稻田稗草、异型莎草、牛毛毡、鸭舌草、窄叶泽泻等。具有一定的毒性，因此安全问题受到高度重视。国标中规定小麦中为0.1mg/kg。因此定期对百菌清残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。[0003]现有技术对于百菌清的检测主要是气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。发明内容[0004]针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提