氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104655835A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.05.27(21)申请号201310582213.5(22)申请日2013.11.20(71)申请人南京亿特生物科技有限公司地址211122江苏省南京市江宁区江宁科学园芝兰路18号(72)发明人洪霞杜霞(51)Int.Cl.G01N33/557(2006.01)G01N33/532(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法(57)摘要本发明氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含氯丙嗪单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有氯丙嗪蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测氯丙嗪，方便、快捷、结果准确。CN104655835ACN104655835A权利要求书1/1页1.氯丙嗪胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；(2)抗体的预处理：将要标记的氯丙嗪抗体在1000r/min，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成氯丙嗪单克隆抗体胶体金标记物；(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)氯丙嗪蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含氯丙嗪蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、氯丙嗪蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2.根据权利要求1所述的氯丙嗪胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白(BSA)和0.8g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。2CN104655835A说明书1/4页氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及动物源食品兽药残留检测技术领域，特别是涉及氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及其制备方法。背景技术[0002]氯丙嗪属于吩噻嗪类代谢物，这种药物主要在肝脏代谢，易产生药物残留，残留的氯丙嗪和部分具有原药活性的代谢物能引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，从而引起人体肝脏、肾脏的病变，还会引起眼部的并发症等。有某些国家和地区的饲养者在食用性动物喂养中添加氯丙嗪，导致相关动物性食品中有氯丙嗪的残留，因此定期对氯丙嗪残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。[0003]现有技术对于氯丙嗪的检测主要是高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。发明内容[0004]针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种氯丙嗪的免疫胶体金检测卡及