检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106596945A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201510660485.1(22)申请日2015.10.14(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人洪霞刘静张淑雅(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了一种检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒，它含有：包被有氧化乐果偶联抗原的酶标板．氧化乐果标准品溶液，浓缩酶结合物，酶结合物工作液，底物显色液，终止液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测样本中氧化乐果的方法，它包括：首先进行样本前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测蔬菜(原料、配合料和浓缩料)样本中氧化乐果的残留量，其操作简便、成本低、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。CN106596945ACN106596945A权利要求书1/1页1.一种检测氧化乐果的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于包括有：(1)包被有氧化乐果偶联抗原的酶标板；(2)氧化乐果标准品溶液；(3)浓缩酶结合物；(4)酶结合物稀释液；(5)底物显色液；(6)终止液。2.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述氧化乐果偶联抗原是由氧化乐果半抗原与载体蛋白偶联得到。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述氧化乐果半抗原的制备方法主要包括如下步骤：1)取20mg氧化乐果，10ul，1，3-丙二胺，催化量的4-二甲氨基吡啶溶解于2mlN，N’-二甲基甲酰胺中，得到I液；2)取20mgN，N’-二环己基碳二亚胺溶解于0.5mlDMF中，得到II液；3)在0℃条件下，将II液缓慢滴加至I液中，恢复室温后，继续反应20h；4)蒸除溶剂，柱层析(洗脱液：二氯甲烷／甲醇，体积比20：1)，得到氧化乐果半抗原。4.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述的浓缩酶结合物为酶标记的氧化乐果单克隆抗体。5.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述浓缩酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶；酶结合物是采用过碘酸钠法将酶标记物与抗体偶联得到。6.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于：所述的终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸溶液，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，底物液A液为过氧化脲溶液，底物液B液为四甲基联苯胺溶液。7.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所用包被缓冲液为PH9.6，0.1mol/L碳酸盐缓冲液，所用封闭液为PH7.2~7.4，0.5%~1%牛血清白蛋白，0.1mol/L磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量百分比。8.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述的酶结合物稀释液为PH7.2~7.4，含0.5%~1%牛血清白蛋白，0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重最百分比。9.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在r所述氧化乐果标准品溶液浓度分别为0ug/L、1ug/L、3ug/L、9ug/L、27ug/L、81ug/L。10.一种检测样品中氧化乐果含量的方法，主要步骤包括：1)将待测样品进行前处理；2)用权利要求1—9任意一项所述的酶联免疫试剂盒进行检测；3)分析检测结果。2CN106596945A说明书1/6页检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒，其适用于蔬菜中氧化乐果测定。技术背景[0002]近年来，有机磷农药(organophosphoruspesticides,Ops)由于具有高效和使用成本低等特点，在世界农业中起着极其重要的作用，是主要的杀虫剂之一。有机磷农药属于中、高毒性农药，具有内吸毒性，在环境中残留量大，大部分难降解，在保护农作物的同时，也造成环境的严重污染，并且直接或间接危及人体健康。氧化乐果属于有机磷农药中应用最广、最多的一种，与其他有机磷农药一样其优点和危害同时井存:氧化乐果采用高浓度灌根施药即导致土壤污染，污染的土壤再经雨水冲刷流入河水中，导致水污染;在防治地面作物害虫时，通常采用涂茎或喷洒的方法施药，药物被植株的茎、叶吸进植株体内，在杀灭害虫的同时造成氧化乐果在植物体内大量残留，通过食物链产生毒害作用，及时发现和检测氧化乐果残留具有十分重要的实际意义。近年来，对有机磷农药残留检测的研究越来越多，手段与方法也不断更新，常见的方法主要有波谱法、色谱法和酶抑制法。波谱法灵敏度不高，一般只做为定性的鉴别方法用于粗选;色谱法是目前检测有机磷农药的最主要检测方法，又分为气相色谱、薄层色谱法和高效液相色谱法三类，