检测头孢噻呋的酶联免疫试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106596921A(43)申请公布日2017.04.26(21)申请号201510660153.3(22)申请日2015.10.14(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人洪霞刘静立雯馨(51)Int.Cl.G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称检测头孢噻呋的酶联免疫试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了一种检测猪肉组织中残留的头孢噻呋的酶联免疫试剂盒，它包括:包被有包被原的酶标板、头孢噻呋标准品溶液、酶标二抗、头孢噻呋特异性抗体、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液、样本提取剂，所述包被原为头孢噻呋偶联抗原，所述酶标二抗为酶标记的羊抗鼠抗抗体。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测头孢噻呋的方法，它包括:首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测猪肉中头孢噻呋的含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。CN106596921ACN106596921A权利要求书1/1页1.一种检测头孢噻呋的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括:包被有包被原的酶标板、头孢噻呋标准品溶液、酶标二抗、头孢噻呋特异性抗体、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液、样本提取剂，所述包被原为头孢噻呋偶联抗原，所述酶标二抗为酶标记的羊抗鼠抗抗体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述头孢噻呋偶联抗原是由头孢噻呋半抗原与载体蛋白偶联得到，所述头孢噻呋半抗原是由头孢噻呋和邻苯二甲酸配反应得到，所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述头孢噻呋半抗原是由头孢噻呋和邻苯二甲酸配反应得到。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述头孢噻呋特异性抗体是以头孢噻呋偶联抗原作为免疫原制备获得，所述头孢噻呋特异性抗体可为头孢噻呋单克隆抗体或头孢噻呋多克隆抗体。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酷酶，当标记酶为辣根过氧化物酶时，底物显色液A液为过氧化氢或过氧化脉，底物显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酷酶时，底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，终止液为1~2mol/L氢氧化钠。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述洗涤液为pH值为7.4，含有0.5%~1.0%吐温-20,0.01%~0.03%叠氮化钠防腐剂、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液；所述复溶液为pH值为7.0,0.02mo1/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；所述样本提取剂为0.1mol/L的盐酸。7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述头孢噻呋标准品溶液的浓度分别为0μg/L,0.75μg/L,3μg/L,9μg/L,27μg/L。8.一种检测样品中头孢噻呋含量的方法，包括步骤:（1）样品前处理；（2）用权利要求1~7任一项所述的试剂盒进行检测；（3）分析检测结果。2CN106596921A说明书1/6页检测头孢噻呋的酶联免疫试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测头孢噻呋的酶联免疫试剂盒，可定性、定量检测猪肉组织样本中头孢噻呋药物的残留量。背景技术[0002]头孢噻呋（ceftiofur）又名赛得福，是第１个动物专用的第３代头孢菌素类抗生素。1988年，FDA批准了头孢噻呋钠用于治疗牛呼吸道细菌性疾病，此时该药在美国首次上市。此后FDA又陆续批准了头孢噻呋钠、盐酸头孢噻呋及头孢噻呋晶体自由酸用于１日龄鸡、火鸡，猪、肉牛、奶牛、马、山羊及绵羊等的呼吸道疾病的治疗。加拿大、日本及欧洲一些国家也相继正式批准用于猪、肉牛、奶牛、羊的呼吸道疾病的治疗。头孢噻呋抗菌谱广，抗菌活性强，对革兰阳性菌、阴性菌及厌氧菌都有很强的抗菌活性，而且对胃酸和β内酰胺酶较稳定，过敏反应少，体内残留非常低，在世界范围内得到广泛应用。目前，国内有多家公司相继研制出头孢噻呋注射液，但制剂的溶剂体系均为植物油、大豆油等油性介质。华南农业大学联合洛阳惠中兽药有限公司在国内首先研制出水性头孢噻呋注射液，由于其溶剂体系为水性，流动性好，易于吸收，肌注时不容易堵塞针头，对动物的刺激性小，具有广阔的市场应用前景。[0003]目前，在肉类组织中，对于头孢噻呋的检测方法有许多，液制连用(LC—MS)、气质连用(GC—MS)、ELISA等等。但常用的理化分析方法需要昂贵的仪器设备、