检测烯酰吗啉的酶联免疫试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108205060A(43)申请公布日2018.06.26(21)申请号201611164047.7(22)申请日2016.12.16(71)申请人镇江亿特生物科技发展有限公司地址212009江苏省镇江市新区丁卯经十二路668号(72)发明人洪霞刘静立雯馨(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N21/31(2006.01)G01N21/78(2006.01)G01N1/34(2006.01)G01N1/38(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称检测烯酰吗啉的酶联免疫试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了一种检测烯酰吗啉的酶联免疫试剂盒，它含有：包被有烯酰吗啉偶联抗原的酶标板．烯酰吗啉标准品溶液，浓缩酶结合物，酶结合物工作液，底物显色液，终止液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测样本中烯酰吗啉的方法，它包括：首先进行样本前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测蔬菜(原料、配合料和浓缩料)样本中烯酰吗啉的残留量，其操作简便、成本低、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。CN108205060ACN108205060A权利要求书1/1页1.一种检测烯酰吗啉的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于包括有：(1)包被有烯酰吗啉偶联抗原的酶标板；(2)烯酰吗啉标准品溶液；(3)浓缩酶结合物；(4)酶结合物稀释液；(5)底物显色液；(6)终止液。2.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述烯酰吗啉偶联抗原是由烯酰吗啉半抗原与载体蛋白偶联得到。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述烯酰吗啉半抗原的制备方法主要包括如下步骤：1)取20mg烯酰吗啉，10ul，1，3-丙二胺，催化量的4-二甲氨基吡啶溶解于2mlN，N’-二甲基甲酰胺中，得到I液；2)取20mgN，N’-二环己基碳二亚胺溶解于0.5mlDMF中，得到II液；3)在0℃条件下，将II液缓慢滴加至I液中，恢复室温后，继续反应20h；4)蒸除溶剂，柱层析(洗脱液：二氯甲烷／甲醇，体积比20：1)，得到烯酰吗啉半抗原。4.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述的浓缩酶结合物为酶标记的烯酰吗啉单克隆抗体。5.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述浓缩酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶；酶结合物是采用过碘酸钠法将酶标记物与抗体偶联得到。6.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于：所述的终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸溶液，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，底物液A液为过氧化脲溶液，底物液B液为四甲基联苯胺溶液。7.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所用包被缓冲液为PH9.6，0.1mol/L碳酸盐缓冲液，所用封闭液为PH7.2~7.4，0.5%~1%牛血清白蛋白，0.1mol/L磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量百分比。8.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在于所述的酶结合物稀释液为PH7.2~7.4，含0.5%~1%牛血清白蛋白，0.1mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重最百分比。9.如权利要求l所述的试剂盒，其特征在r所述烯酰吗啉标准品溶液浓度分别为0ug/L、1ug/L、3ug/L、9ug/L、27ug/L、81ug/L。10.一种检测样品中烯酰吗啉含量的方法，主要步骤包括：1)将待测样品进行前处理；2)用权利要求1—9任意一项所述的酶联免疫试剂盒进行检测；3)分析检测结果。2CN108205060A说明书1/5页检测烯酰吗啉的酶联免疫试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测烯酰吗啉的酶联免疫试剂盒，其适用于蔬菜中烯酰吗啉测定。技术背景[0002]烯酰吗啉为专一杀卵菌纲真菌杀菌剂，对霜霉属和疫霉属真菌病害防治效果显著，是我国当前广泛使用的杀菌剂之一。目前烯酰吗啉为主要成分的农药制剂在我国主要登记的作物有黄瓜、葡萄，用于防治霜霉病；于辣椒、甜瓜、马铃薯、甘蓝、番茄、烟草等作物登记的制剂较少，主要用于防治这些作物中的疫病和霜霉病，烟草中则为黑胫病。烯酰吗啉属低毒农药．但其使用广泛．农残水平受到关注。目前部分国家和区域食品安全规范对烯酰吗啉的最大残留限量做了规定，烯酰吗啉在部分作物之间的MRL值差别非常大，且有些作物的MRL值相对较低，对检测技术要求较高而我国尚无烯酰吗啉残留的标准分析方法和MRL值规定，这使该农药是否存在不合理使用以及是否在农产品中的残留损害消费者健康等重要信息没有统一可靠的判断依据和方法。近年来文献报道的烯酰吗啉残留检测方法多采用色谱分析，主要有气相色谱、