具有pNPPC水解酶活性的多肽，其编码基因、制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106632683A(43)申请公布日2017.05.10(21)申请号201510741209.8C12N1/19(2006.01)(2006.01)(22)申请日2015.11.03C12N1/15C12R1/19(2006.01)(71)申请人丰益(上海)生物技术研发中心有限C12R1/125(2006.01)公司C12R1/84(2006.01)地址200137上海市浦东新区高东工业区高C12R1/685(2006.01)东路118号A区C12R1/39(2006.01)(72)发明人周美凤徐正军许骏牛其文(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31100代理人韦东(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N9/20(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/55(2006.01)G01N33/573(2006.01)C11B3/00(2006.01)权利要求书2页说明书29页C12N1/21(2006.01)序列表37页附图9页(54)发明名称具有pNPPC水解酶活性的多肽，其编码基因、制备方法及应用(57)摘要本发明涉及具有pNPPC水解酶活性的多肽，其编码基因、制备方法及应用。本发明分离的多肽选自：(1)SEQIDNO:4、6、8或10所示的氨基酸序列；(2)SEQIDNO:21或其N端截短至多15个氨基酸残基和/或C端截短至多28个残基所获得的片段；(3)在(1)或(2)所述的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时保留SEQIDNO：4、6、8、10或SEQIDNO:21或其片段所具备的pNPPC水解活性的由(1)或(2)衍生的多肽；和(4)含上述(1)、(2)或(3)所述氨基酸序列的多肽。本发明多肽如MPPX具有较高底物专一性等性能，非常适合于该酶在酶联免疫分析中的应用。CN106632683ACN106632683A权利要求书1/2页1.分离的多肽，所述多肽选自：(1)SEQIDNO:4、6、8或10所示的氨基酸序列；(2)SEQIDNO:21或其N端截短至多15个氨基酸残基和/或C端截短至多28个残基所获得的片段；(3)在(1)或(2)所述的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时保留SEQIDNO：4、6、8、10或SEQIDNO:21或其片段所具备的pNPPC水解活性的由(1)或(2)衍生的多肽；和(4)含上述(1)、(2)或(3)所述氨基酸序列的多肽。2.如权利要求1所述的分离的多肽，其特征在于，(2)所述的片段选自：SEQIDNO:2、SEQIDNO:23、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31和SEQIDNO:49；或(4)所述的多肽为融合蛋白，优选为(1)、(2)或(3)所述的氨基酸序列与磷脂酶或亲和素的融合蛋白；或(4)所述的多肽由(1)、(2)或(3)所述的氨基酸序列与促进所述氨基酸序列表达、分泌、鉴定和/或纯化的氨基酸序列组成。3.如权利要求1或2所述的分离的多肽，其特征在于，所述磷脂酶是磷脂酶C，优选为来自芽孢杆菌属细菌如蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)的磷脂酶C，优选地，所述磷脂酶C含SEQIDNO:55所示的氨基酸序列，或由所述序列组成；或(1)、(2)或(3)所述的氨基酸序列直接与所述磷脂酶连接，或经由接头序列，优选为多甘氨酸接头序列与磷脂酶连接；或所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:53所示。4.一种多核苷酸序列，选自：(a)编码权利要求1－3中任一项所述的分离的多肽的多核苷酸序列；(b)与(a)互补的序列；和(c)(a)或(b)所述的多核苷酸序列的长15～30个碱基的片段。5.如权利要求4所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列选自：SEQIDNO:1、3、5、7、9、20、22、26、28、30和48。6.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求4或5所述的多核苷酸序列；优选地，所述核酸构建物是表达载体，用于表达所述多核苷酸序列编码的氨基酸序列。7.一种宿主细胞，所述宿主细胞含有权利要求6所述的核酸构建物；优选地，所述宿主细胞选自：大肠杆菌(E.coli)、毕赤酵母(Pichiapastoris)、黑曲霉(Aspergillusniger)、荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。8.权利要求1－3中任一项所述的分离的多肽、权利要求4或5所述的多核苷酸序列、权利要求6所述的核酸构建物和权利要求7所述的宿主细胞在磷脂改性、饲料改良、食品工业、化工、生物及医学检测方面的应用。9.如权利要求9所述的