一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110484584A(43)申请公布日2019.11.22(21)申请号201910883881.9A61P19/10(2006.01)(22)申请日2019.09.19(71)申请人大连工业大学地址116034辽宁省大连市甘井子区轻工苑1号大连工业大学(72)发明人杜明陈慧许喆徐献兵马武超夏小雨乔昕昱(74)专利代理机构大连格智知识产权代理有限公司21238代理人刘琦(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/30(2006.01)A23L33/18(2016.01)A61K38/01(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图5页(54)发明名称一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，以牡蛎肉为原料，制备牡蛎浆液；依次经过胃蛋白酶酶解、胰酶酶解、乙醇沉淀、减压浓缩及干燥(冷冻干燥或喷雾干燥)，获得具有延缓骨质流失活性的多肽。本发明采用胃蛋白酶和胰酶对牡蛎浆液二次酶解，再使用乙醇除去糖类与蛋白，较好的减少活性多肽再降解，利于保留活性多肽的完整性，防止体内胃肠道酶导致的活性改变或降低；所得多肽对成骨细胞增殖率最高达到168％。通过体内实验证实，本发明开发了牡蛎组织的二次酶解工艺，逐步提高延缓骨质流失活性多肽的纯度，得到了一种具有延缓骨质流失活性的牡蛎多肽产品。所述延缓骨质流失活性多肽可用于预防骨质疏松等相关食品或药品的开发。CN110484584ACN110484584A权利要求书1/2页1.一种具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉，按料液重量比1:3～1:5加水，0～4℃、4000～5000rpm匀浆，每次匀浆时间为1～2min，间歇时间为30～40s，总共匀浆3～5次，得牡蛎浆液；S2、牡蛎浆液的一次酶解：将步骤S1所述牡蛎浆液的pH调节到2.0～4.0，加入胃蛋白酶，在温度30～37℃搅拌1～2小时，得酶解液A；其中，所述胃蛋白酶的添加量以所述牡蛎浆液中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胃蛋白酶4500～5000U；S3、牡蛎浆液的二次酶解：将步骤S2所述酶解液A的pH调节到6.5～8.2，加入胰酶，在温度30～37℃搅拌1～3小时，得酶解液B；将所述酶解液B离心，取上清液A；其中，所述胰酶的添加量以上述酶解液A中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胰酶4500～5000U；S4、乙醇沉淀：取步骤S3所述上清液A，加入其2～4倍体积的无水乙醇，在4～7℃静置24～48h，离心取上清液B；S5、旋转蒸发：取步骤S4所述上清液B，置于30℃～45℃进行旋转蒸发至所述上清液B体积的1/10～1/15，得浓缩液；将所述浓缩液干燥，所得干燥的粉末为具有延缓骨质流失活性的多肽；其中，所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。2.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2所述搅拌的转速为45～60rpm。3.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述离心的参数为：10000～12000g、8～10min。4.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4所述离心的参数为：10000～12000g、8～10min。5.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述冷冻干燥的时间-温度程序设置如下，第一段：-60℃～-50℃冷冻3～5小时，第二段：-45℃～-40℃冷冻1～3小时，第三段：-30℃～-25℃冷冻1～2小时，第四段：-10℃～-5℃冷冻1～2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥24～48小时；在第二段抽真空，所述第二段至第七段真空度18～22Pa；真空泵启动温度为-60℃～-50℃，隔板温度设定为-30℃～-20℃。6.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述喷雾干燥为常压高温喷雾干燥：喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为30％～40％，设置进风温度150～220℃，物料温度控制在60～90℃。7.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述喷雾干燥为低温喷雾干燥：低温喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为15％～40％，真空度达到-0.01～0.06MPa，进风温度为95～145℃，物料温度控制在30～60℃。8.根据权利要求1所述具有延缓骨质流失活性多肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉100g，加水300