西地那非半抗原、人工抗原及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108409744A(43)申请公布日2018.08.17(21)申请号201810247752.6G01N33/68(2006.01)(22)申请日2018.03.23(71)申请人广东工业大学地址510000广东省广州市东风东路729号(72)发明人蔡森源卢宇靖黄玄贺李莹龙威黄宝华张焜(74)专利代理机构广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙)44467代理人王海曼(51)Int.Cl.C07D487/04(2006.01)C07K14/765(2006.01)C07K1/107(2006.01)C07K1/34(2006.01)G01N21/33(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称西地那非半抗原、人工抗原及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种西地那非半抗原、人工抗原及其制备方法，旨在提供一种西地那非半抗原、人工抗原及其制备方法。本发明半抗原在保留西地那非基本结构的基础上引入连接臂结构和用于偶联大分子的活性基团，这样既有利于其与大分子偶联，又可以在偶联后充分暴露本身分子结构和分子量较小的西地那非基本结构，避免了其被大分子掩蔽而影响动物机体的识别；本发明通过活性酯化法将半抗原与蛋白质偶联制备人工抗原，偶联比可达10.7，可用于西地那非的免疫检测；其分子结构式：CN108409744ACN108409744A权利要求书1/2页1.一种西地那非半抗原，其特征在于，其分子结构式如式I所示：其中，n为1或2或3。2.制备权利要求1所述的西地那非半抗原的方法，其特征在于，在反应器中，放入溶剂1,4-二氧六环，再加加入质量比为1﹕5～13的西地那非与环形酸酐，在弱碱性、40～50℃密闭条件搅拌反应10～12h，反应结束后，将反应液倾入水中，用乙酸乙酯多次萃取，合并萃取液，以无水Na2SO4进行干燥，浓缩后得到固体，重结晶得到固体产物。3.根据权利要求2所述的西地那非半抗原的方法，其特征在于，所述环形酸酐为丁二酸酐、戊二酸酐或己二酸酐。4.根据权利要求2所述的西地那非半抗原的方法，其特征在于，所述弱碱性条件的pH值为7.5。5.根据权利要求4所述的西地那非半抗原的方法，其特征在于，所述pH是通过加入三乙胺调节。6.一种西地那非人工抗原，其特征在于，其分子结构式如式II所示：其中，n为1、2或3。7.制备权利要求5所述西地那非人工抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将权利要求1所述的西地那非半抗原与EDC、NHS加入至有机溶剂中，在15～30℃、避光条件下搅拌反应12～14h，得到一号反应液；2)将载体蛋白与磷酸缓冲液混合按照质量比1：1～1.2混合，得到二号反应液；3)在搅拌条件下，将一号反应液按每3-7秒1滴的速度滴入二号反应液，滴加完毕，在15～30℃、避光条件下搅拌反应30～60min，再在3～5℃、避光条件下搅拌反应46～50h，对反应液进行纯化即得；所述二号反应液中的载体蛋白与所述一号反应液中的西地那非半抗原质量比例为：1:15～25。8.根据权利要求7所述西地那非人工抗原的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为2CN108409744A权利要求书2/2页DMF。9.根据权利要求5所述西地那非人工抗原的制备方法，其特征在于，所述的纯化是将反应液进行离心处理，并将上清液置于装有pH值为7.0～7.5磷酸盐缓冲液的分子截留为20000～30000的透析袋中，在3～5℃的条件下进行透析46～50小时，每隔6～8小时换一次磷酸盐缓冲液，保留透析袋中所得溶液。10.根据权利要求5所述西地那非人工抗原的制备方法，其特征在于，所述的载体蛋白为牛血清蛋白BSA。3CN108409744A说明书1/7页西地那非半抗原、人工抗原及其制备方法技术领域[0001]本发明公开了一种半抗原、人工抗原，具体涉及一种西地那非半抗原、人工抗原，本发明还公开了西地那非半抗原、人工抗原的制备方法。背景技术[0002]西地那非(Sildenafil)，即枸橼酸西地那非片，也称万艾可，俗称“伟哥”，分子式：C22H30N6O4S，CAS登录号为139755-83-2，可以有效改善阴茎勃起硬度，用于治疗男性勃起功能障碍(ED，也称阳痿)。该药上市20余年，推动ED治疗取得了革命性的进展。以它为代表的口服药物被美国、欧洲、中国、日本等多个国家和地区的医学指南推荐作为ED的一线治疗。[0003]西地那非最常见的副作用是：头痛、面部潮红、胃部不适、视力异常，如视觉色彩改变(如有蓝色色晕)和视力模糊、鼻塞或流鼻涕、背痛、肌肉痛、恶心、头晕、皮疹。也可能引起严重的副作用，包括：1.持续勃起(异常勃起)：如果持续勃起超过4个小时，立即寻求医疗帮助。如不即刻处理，异常勃起能