丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106872681A(43)申请公布日2017.06.20(21)申请号201710057106.9(22)申请日2017.01.23(71)申请人云南双鱼贝贝健康管理有限公司地址653100云南省玉溪市高新区抚仙路86号C幢101室(72)发明人杨绍元杨少琼(74)专利代理机构江苏爱信律师事务所32241代理人赵赞赞(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图1页(54)发明名称丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供了丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒，包括酶标板、酶标记抗抗体、丁胺卡那霉素标准品、底物显色液、终止液、洗涤液、丁胺卡那霉素抗体，所述酶标板上包被有丁胺卡那霉素半抗原-蛋白偶联物。本发明公开的试剂盒可定性、定量检测鸡蛋和鸡肉样本中丁胺卡那霉素、卡那霉素的残留。鸡蛋和鸡肉样本中丁胺卡那霉素和卡那霉素的检测方法，首先处理待测鸡蛋和鸡肉样本，然后用酶联免疫试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、携带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品定性、定量的检测。CN106872681ACN106872681A权利要求书1/1页1.一种丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒，包括酶标板、酶标记抗抗体、丁胺卡那霉素标准品、底物显色液、终止液、洗涤液、丁胺卡那霉素抗体，所述酶标板上包被有丁胺卡那霉素-蛋白偶联物。2.如权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述丁胺卡那霉素-蛋白偶联物由丁胺卡那霉素与卵清蛋白通过偶联得到。3.如权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述丁胺卡那霉素抗体为丁胺卡那霉素单克隆抗体或丁胺卡那霉素多克隆抗体。4.如权利要求3所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述丁胺卡那霉素抗体由丁胺卡那霉素-蛋白偶联物作为免疫原制备得到，所述蛋白为牛血清白蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。5.如权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述丁胺卡那霉素标准品溶液的浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1.5μg/L，4.5μg/L，13.5μg/L，40.5μg/L。6.如权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶，所述显色底物液为显色底物A液和显色底物B液，所述显色底物A液为过氧化脲，显色底物B液为四甲基联苯胺，终止液为2mol/L盐酸。7.如权利要求1或2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述洗涤液为含有0.5-1.5‰TritonX-100和0.5‰Proclin300防腐剂的Tris缓冲液，其中，Tris缓冲液浓度为0.05mol/L,pH为8.0，所述千分比均为体积比。8.一种用权利要求1～7任一项所述的酶联免疫试剂盒检测样品中丁胺卡那霉素和卡那霉素残留的方法，主要包括以下步骤：首先处理待测样品；然后用权利要求1～7任一项所述的酶联免疫试剂盒进行检测；最后分析检测结果。2CN106872681A说明书1/8页丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种丁胺卡那霉素和卡那霉素二合一快速检测酶联免疫试剂盒，其特别适于鸡蛋和鸡肉中丁胺卡那霉素和卡那霉素药物残留的检测。技术背景[0002]丁胺卡那霉素(Amikin)又名阿米卡星，见图1，是卡那青霉素a的半合成衍生物的硫酸盐。卡那霉素是一种蛋白质生物合成抑制剂，它可以结合于细菌细胞内的核糖体30s亚基，导致mRNA的错读，来抑制细菌蛋白质的合成抑制细菌生长，临床主要用于对庆大霉素，卡那霉素耐药的革兰阴性杆菌如大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌引起的各种感染。长期或反复大量摄入丁胺卡那霉素可导致前庭神经和听神经损害，肾脏出现轻度损害，严重者可出现肾功能衰竭。[0003]为了保证人类健康，日本和欧盟等国家和地区制定了卡那霉素的最大残留限量(MRLs)标准：肌肉为100μg/kg、肾脏为2500μg/kg。2002年我国国家质量监督检验检疫局出台的文件中明确限定了卡那霉素在动物源性食品中的最大残留限量：肌肉100μg/kg，肝脏300μg/kg。传统的检测方法有微生物检定法和高效液相色谱法等，这些方法用于鸡蛋或鸡肉样本中的丁胺卡那霉素或卡那霉素检测，前处理繁琐序复杂，测定周期长，甚至需要昂贵的仪器，成本较高，不能满足鸡蛋和鸡肉样品中丁胺卡那霉素和卡那霉素的实时快速检测。发明内容[0004]针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种丁胺卡