预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共12页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103290124103290124B(45)授权公告日2014.12.17(21)申请号201310206129.3Kyung-MiSongetal.Goldnanoparticle-basedcolorimetricdetection(22)申请日2013.05.29ofkanamycinusingaDNAaptamer.(73)专利权人华南农业大学《AnalyticalBiochemistry》.2011,第415卷地址510642广东省广州市天河区五山路175-181.483号审查员王超(72)发明人雷红涛孙远明刘信嘉王弘沈玉栋杨金易徐振林(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人任重(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12Q1/28(2006.01)(56)对比文件李忠琴等.卡那霉素A、B多元弱碱离解常数的测定.《高校化学工程学报》.2004,(第02期),全文.郭克泰等.抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选和鉴定.《生物工程学报》.2003,第19卷(第6期),.权利要求书1页权利要求书1页说明书8页说明书8页序列表1页序列表1页附图1页附图1页(54)发明名称一种卡那霉素A酶联适配体检测方法及应用(57)摘要本发明涉及食品安全检测领域,具体地,公开了一种卡那霉素A酶联适配体检测方法及其应用。本发明通过链霉亲和素-生物素-适配体模式实现对卡那霉素A的测定,同时优化了检测条件,最终得到检测限最低的条件,该条件具有高灵敏、高特异性。该方法能够特异性检测牛奶、猪肉、鸡肉、猪肝、蜂蜜中的卡那霉素A,具有广阔的应用前景。CN103290124BCN103294BCN103290124B权利要求书1/1页1.一种卡那霉素A酶联适配体检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得7~9μg/mL的包被缓冲液,将包被缓冲液加入微孔板中,每孔100~200μL,包被过夜,洗涤微孔板后,加入封闭缓冲液封闭,最后烘干;S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA适配体得浓度为0.5~1nmol/L的适配体溶液,将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中,每孔100~200μL,孵育,洗板后拍干;得固相适配体;S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A分子形成标记竞争物KaA-HRP;S4.将待测样品和KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中,即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测;所述卡那霉素A的ssDNA适配体的序列如SEQIDNO:1所示。2.根据权利要求1所述检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.用碳酸盐缓冲液稀释链霉亲和素得7~9μg/mL的包被缓冲液,将包被缓冲液加入微孔板中,每孔100~200μL,包被过夜,用磷酸盐缓冲液洗涤微孔板后,再加入0.1~0.3%酪蛋白封闭,最后烘干;S2.用PBS缓冲液稀释5’端修饰有生物素的卡那霉素A的ssDNA适配体得浓度为0.5~1nmol/L的适配体溶液,将适配体溶液加入步骤S1的微孔板中,每孔加入100~200μL,孵育,洗板后拍干;得到固相适配体;S3.用辣根过氧化物酶标记卡那霉素A分子形成标记竞争物KaA-HRP;S4.将待测样品和标记竞争物KaA-HRP同时加入步骤S2制备得到的固相适配体中,即可实现卡那霉素A的酶联适配体检测;所述卡那霉素A的ssDNA适配体的序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S1所述碳酸盐缓冲液为pH9.6,0.01~0.5mol/L的碳酸盐缓冲液。4.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S2所述PBS缓冲液为含有4~6mMMgCl2的0.01mol/LpH7.4的PBS缓冲液。5.根据权利要求1或2所述检测方法,其特征在于,步骤S3中所述标记的方法为:将卡那霉素A和辣根过氧化物酶按照1:250~300的摩尔比混合后溶于1~2mLPBS溶液中,加入20~40mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺,室温反应1~2h,透析2~4天,即可完成标记。6.根据权利要求5所述检测方法,其特征在于,所述PBS溶液为0.01mol/L,pH7.2的PBS溶液。7.权利要求1至6任一项所述卡那霉素A酶联适配体检测方法在检测食品中卡那霉素A中的应用。8.根据权利要求7所述应用,其特征在于,所述食品为牛奶、猪肉、鸡肉、猪肝或蜂蜜。2CN103290124B说明书1/8页一种卡那霉素A酶联适配体检测方法及应用技术领域[0001]本发明涉及食品安全检测领域,具体地,涉及一种卡那霉素A酶联适配体检测方法及其应用。背景技术[0