一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106957906A(43)申请公布日2017.07.18(21)申请号201611204857.0(22)申请日2016.12.23(71)申请人孙涛地址610072四川省成都市青羊区大庆路91号2栋1单元10号(72)发明人孙涛刘潇(74)专利代理机构成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214代理人易小艺(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书12页序列表5页附图3页(54)发明名称一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒(57)摘要本发明属于分子生物学领域，特别是涉及一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒，其特征在于：所述引物组合包括TCR5’Oligo接头，TCR3’Oligo(dT)引物，TCRC区引物，标签上下游引物，所述试剂盒含有如权利要求1或2所述的引物组合。通过从接头的上游引物到C区的下游引物，获得T细胞受体（TCR）基因序列的全长信息。CN106957906ACN106957906A权利要求书1/2页1.一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合，其特征在于：所述引物组合包括TCR5’Oligo接头，TCR3’Oligo(dT)引物，TCRC区引物，标签上下游引物，每种引物序列如下：TCR5’Oligo接头，其碱基序列为：5’ATGCATCGGATCTTCAGCATGAACTTrGrGrG3’；TCR3’Oligo(dT)引物：5’TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGA3’；TCR5’端接头引物序列为：5’GTCTCGTGGGCTGGGCGATGTGTATGAGAGACAGCATGCATCGGATCTTCAGCATGA3’；TCRC区引物序列为：5’TCGTCGCCAGCGTCGGAAGTGTATAAGAGACAGTCGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG3’；标签上游引物：5’CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[index1]GTCTCGTGGGCTGG3’；标签下游引物：5’AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[index2]TCGTCGCCAGCGTC3’。2.根据权利要求2所述的一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合，其特征在于：所述index1为ATCTATCG、TCAGGTGA、CACTAGTT、GAATTGCC、ATGTACAA、GATTCAGT、CTGTTCGT或TATACGGC中的一种；index2为TAGCTACT、ATTATAGC、CCCGTACT、GGGTATAA、AGCAGGTG、TATACGTA、CACCTAGT或GTTGCTAC中的一种。3.根据权利要求1或2所述的一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有如权利要求1或2所述的引物组合。4.根据权利要求3所述的一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR缓冲液、Q5High-Fidelity2XMasterMix、去核酸酶水、AMPureXPBeads和70％乙醇。5.根据权利要求4所述的一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：(1)PCR缓冲液：9.5μL；(2)阳性对照RNA(1μg/μl)：10μL；(3)10μMTCR3’Oligo(dT)引物：1.1μL；(4)10μMTCR5’端接头引物和10μMTCRC区引物：各1.1μL；(5)Q5High-Fidelity2XMasterMix：55μL；(6)10μM标签上游引物和10μM标签下游引物：各1.1μL；(7)去核酸酶水：105μL；(8)AMPureXPBeads：88μL；(9)70％乙醇：165μL。6.根据权利要求4或5所述的基于高通量高通量检测T细胞白血病微小残留病的试剂盒，其特征在于：所述PCR缓冲液由以下体系组成：2CN106957906A权利要求书2/2页3CN106957906A说明书1/12页一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒技术领域[0001]本发明属于分子生物学检测领域，特别是涉及一种应用于高通量测序检测T细胞白血病微小残留病的引物组合及试剂盒。背景技术[0002]白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。克隆性白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他非造血组织和器官，同时抑制正常造血功能，T细胞白血病属于T细胞的恶性克隆性增值。[0003]随着化