一种茎尖微芽嫁接穿刺法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107094511A(43)申请公布日2017.08.29(21)申请号201710538057.0(22)申请日2017.07.04(71)申请人西南林业大学地址650224云南省昆明市白龙寺300号(72)发明人刘月刘惠民李贤忠王连春(74)专利代理机构昆明今威专利商标代理有限公司53115代理人赛晓刚方金敏(51)Int.Cl.A01G1/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种茎尖微芽嫁接穿刺法(57)摘要本发明属于果树种植领域，具体涉及一种微芽嫁接方法及其应用,具体涉及一种茎尖微芽嫁接穿刺法。本发明所述茎尖微芽嫁接穿刺法，包括了如下步骤：取1-2mm包含3-4个叶原基的接穗，将接穗在1mg/L6-BA中浸泡10min进行预处理；在无菌条件下，砧木去顶留茎长1.5-2cm，距顶端5-8mm处纵切一刀划通，切口在茎段1/3处木质部与韧皮部交接处划通，茎段两侧形成“|”型切口，将接穗保留3-4个叶原基移至切口内。本发明通过茎尖微芽嫁接穿刺法，改善传统茎尖微芽嫁接，如倒“T”接法，劈接法，三角形法等操作难，切口大，接穗固定不稳，且在生长中易失水，难以与砧木充分结合的问题，从而提高茎尖微芽嫁接成活率，提高脱毒苗的生产效率，为日后无毒苗育种提高生产效率。CN107094511ACN107094511A权利要求书1/1页1.一种茎尖微芽嫁接穿刺法，包括如下步骤：1)取1-2mm包含3-4个叶原基的接穗，将接穗在1mg/L6-BA中浸泡10min进行预处理；2)在无菌条件下，砧木去顶留茎长1.5-2cm，距顶端5-8mm处纵切一刀划通，切口在茎段1/3处木质部与韧皮部交接处划通，茎段两侧形成“|”型切口，将接穗保留3-4个叶原基切取茎尖嫁接至切口内。2.根据权利要求1所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的穿刺法茎尖微芽嫁接方法应用于试管内微芽嫁接和田间微芽嫁接。3.根据权利要求2所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的试管内微芽嫁接的接穗为嫁接树种成年态一年生半木质化茎段离体诱导的不定芽的茎尖，所述的砧木为砧木种子进行离体培养后，取刚萌芽30d的实生苗，并在高倍体视显微镜下，将接穗嫁接至砧木切口内。4.根据权利要求2所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的试管内微芽嫁接还包括如下步骤：在步骤2)后，将嫁接苗放入滤纸桥上，然后放进试管内，用透气封瓶膜包裹试管口，培养30-45天。5.根据权利要求2所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的田间微芽嫁接还包括如下步骤，在步骤2)后，将嫁接苗在切口处用保鲜膜包裹以减少砧穗失水。6.根据权利要求1所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的砧木取刚萌芽30d的实生苗。7.根据权利要求1所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的砧木种子为当年生果实。8.根据权利要求1所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的砧木种子选自云南省西双版纳州普文镇的曼赛龙柚当年生果实。9.根据权利要求4或5所述的茎尖微芽嫁接穿刺法，其特征在于：所述的穿刺法茎尖微芽嫁接方法还包括以下步骤，嫁接后7-10d，砧木萌芽开始出现，及时除萌2-3次。2CN107094511A说明书1/5页一种茎尖微芽嫁接穿刺法技术领域[0001]本发明属于种植领域，涉及一种茎尖微芽嫁接方法，特别是一种茎尖微芽嫁接穿刺法。背景技术[0002]随着当今科技发展，果树在栽培过程中常采用无性繁殖，而无性繁殖虽然能扩大生产效率，但果树在生产中会因此交叉感染多种病毒病和类似病毒病，很多传染性疾病如柑橘黄龙病不仅是毁灭性病害，且目前没有一种药物能抑制黄龙病病毒而不伤害植株本身。因此建立完整的葡萄柚无病毒苗木繁殖体系迫在眉睫。目前，控制果树病毒类病毒的方法有四种，其中茎尖微芽嫁接就被证实能获得无毒苗。STG(Shoot-tipGrafting)茎尖嫁接技术是1972年Murashige首次提出的方法。1975年Navarro在此加以改进将茎尖分生组织嫁接到经过脱毒培养的试管砧木上得到完整植株，通过检测证明STG可以脱除柑橘衰退病、鳞皮病和裂皮病。微芽嫁接不仅能有效果树分离复合感染的病毒，同时解决木本植物组培生长缓慢、生根困难的问题，还能明显缩短果树童期。茎尖微芽嫁接技术在人为控制下不受天气，季节，温度等因素限制，可应用在果树抗性育种、苗木快繁等方面。[0003]20世纪七八十年代以来，我国对利用茎尖微芽嫁接脱毒技术获得无毒苗展开了大量的研究，目前已在苹果、梨、柿子、樱桃等果树育种上得到广泛应用。由于柑橘成年态果树离体组织分化困难，因此很多学者开展了微芽嫁接脱毒试验，Nararro通过茎尖微芽嫁接STG成功获得脱毒苗柑橘母株，之