植酸酶突变体.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107236717A(43)申请公布日2017.10.10(21)申请号201610184337.1(22)申请日2016.03.28(71)申请人青岛蔚蓝生物集团有限公司地址266061山东省青岛市崂山区苗岭路29号山东高速大厦12A07室(72)发明人吴秀秀王华明(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.C12N9/16(2006.01)C12N15/55(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12R1/84(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表15页附图1页(54)发明名称植酸酶突变体(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种植酸酶突变体、其制备方法及应用、编码该植酸酶突变体的DNA分子、载体、宿主细胞。本发明植酸酶突变体，包含N126D单点突变的植酸酶突变体Phy7.1，包含V211W单点突变的植酸酶突变体Phy7.2，包含N126D和V211W两点突变的植酸酶突变体Phy8。与植酸酶PHY6相比，80℃处理10min后，突变体Phy7.1、Phy7.2和Phy8的残留酶活分别提高了12.48％、15.50％和20.90％；85℃处理5min后，突变体Phy7.1、Phy7.2和Phy8的残留酶活分别提高了13.05％、18.50％和27.56％，其耐热性显著高于植酸酶PHY6，从而有利于植酸酶在饲料中的广泛应用。CN107236717ACN107236717A权利要求书1/1页1.一种植酸酶突变体，其特征在于，其具有(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的氨基酸序列中任意一个：(Ⅰ)与植酸酶的氨基酸序列SEQIDNO:1具有至少70％同源性的序列；(Ⅱ)具有所述植酸酶的至少一个免疫表位，且所述植酸酶的氨基酸序列SEQIDNO:1经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；(Ⅲ)由如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列或其互补序列或因遗传密码的简并性而与如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列或其互补序列的核苷酸序列不同的序列编码的氨基酸序列；所述取代为取代1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17或18个氨基酸。2.根据权利要求1所述的植酸酶突变体，其特征在于，所述取代为第46位、第62位、第70位、第73位、第75位、第80位、第114位、第126位、第137位、第142位、第146位、第159位、第161位、第176位、第187位、第211位、第255位或第380位中的一个或多个氨基酸被取代。3.根据权利要求1所述的植酸酶突变体，其特征在于，所述取代为第46位、第62位、第70位、第73位、第75位、第80位、第114位、第137位、第142位、第146位、第159位、第161位、第176位、第187位、第255位和第380位的氨基酸被取代。4.根据权利要求3所述的植酸酶突变体，其特征在于，所述植酸酶突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示，编码该氨基酸的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。5.根据权利要求2至4任一项所述的植酸酶突变体，其特征在于，所述取代还包括第126位和/或第211位的氨基酸被取代。6.根据权利要求5所述的植酸酶突变体，其特征在于，其具有如SEQIDNO:5或SEQIDNO:7或SEQIDNO:9所示的氨基酸序列。7.编码如权利要求6所述的植酸酶突变体的DNA分子。8.根据权利要求7所述的DNA分子，其特征在于，其具有如SEQIDNO:6或SEQIDNO:8或SEQIDNO:10所示的核苷酸序列。9.具有如权利要求7或8所述DNA分子的载体。10.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求9所述的载体。11.根据权利要求1至6任一项所述植酸酶突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获取编码具有(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的氨基酸序列中任意一个的DNA分子：(Ⅰ)与植酸酶的氨基酸序列SEQIDNO:1具有至少70％同源性的序列；(Ⅱ)具有植酸酶的至少一个免疫表位，且所述植酸酶的氨基酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；(Ⅲ)由如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列或其互补序列或因遗传密码的简并性而与如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列或其互补序列的核苷酸序列不同的序列编码的氨基酸序列；步骤2：将步骤1获得的所述DNA分子与表达载体融合，构建重组表达载体，转化宿主细胞；步骤3：诱导含重组表达载体的宿主细胞表达融合蛋白，分离纯化表达的融合蛋白。2CN107236717A说明书1/9页植酸酶突变体技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，特