耐高温中性植酸酶突变体.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115094049A(43)申请公布日2022.09.23(21)申请号202210880762.XC12R1/885(2006.01)(22)申请日2022.07.26(71)申请人青岛蔚蓝生物集团有限公司地址266100山东省青岛市崂山区九水东路596-1号(72)发明人鲍锴李馨培吴秀秀(51)Int.Cl.C12N9/16(2006.01)C12N15/55(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N15/80(2006.01)C12N1/19(2006.01)C12N1/15(2006.01)A23K20/189(2016.01)A23K50/80(2016.01)权利要求书1页说明书6页C12R1/84(2006.01)序列表8页(54)发明名称耐高温中性植酸酶突变体(57)摘要本发明涉及基因工程与蛋白质改造技术领域，具体涉及一种耐高温中性植酸酶突变体及其应用。本发明以野生型植酸酶AN为基础，提供了分别包含K121M、S181T和M241F单点突变的植酸酶突变体，其在80℃条件下处理5min后，酶活残留率比野生型提高了26.1%‑240.5%。从而说明，本发明提供的突变位点K121M、S181T、M241F能显著提高植酸酶的耐热性，有利于促进其在水产饲料领域的广泛应用。CN115094049ACN115094049A权利要求书1/1页1.一种植酸酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与SEQIDNO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与SEQIDNO:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：121，181，241。2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQIDNO:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。3.如权利要求1或2所述的突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：K121M，S181T，M241F。4.如权利要求3所述的突变体，其特征在于，所述突变体包含的取代或取代的组合选自下述取代和取代的组合：K121M；S181T；M241F；K121M/S181T；K121M/M241F；S181T/M241F；K121M/S181T/M241F。5.如权利要求4所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:3或SEQIDNO:4或SEQIDNO:5所示。6.编码权利要求5所述植酸酶突变体的DNA分子。7.包含权利要求6所述DNA分子的重组表达质粒。8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求7所述的重组表达质粒。9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为毕赤酵母（Pichiapastoris）或里氏木霉（Trichodermareesei）。10.权利要求1‑5任一所述植酸酶突变体在水产饲料领域中的应用。2CN115094049A说明书1/6页耐高温中性植酸酶突变体技术领域[0001]本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体涉及一种耐高温中性植酸酶突变体及其应用。背景技术[0002]随着全球水产养殖业的快速发展，鱼粉等优质动物蛋白资源的紧缺已成为制约水产养殖业发展的重要因素。开发新的饲料资源，提高现有饲料资源的利用率，是饲料行业所面临的重大问题。近年来，许多动植物蛋白源被开发出来用以降低或取代鱼粉的使用量，比如豆粕、菜粕、棉粕、肉骨粉、血粉等，其中植物蛋白源因其资源量大，价格低而广泛应用于水产饲料中。然而与鱼粉相比，这些植物蛋白源通常具有一种或多种方面的不足，如氨基酸组成不平衡，存在抗营养因子(植酸、非淀粉多糖等)、适口性较差、消化率较低等，限制了植物蛋白源在水产饲料中的大量使用。为提高植物蛋白源的利用率，一些营养策略与技术已被开发并应用于饲料工业中。利用发酵工程和基因工程等生物技术手段开发出的酶制剂，能够提高饲料的利用率，在很大程度上缓解饲料资源紧缺的状况。酶制剂因高效、安全、环保，符合资源节约型社会的要求而受到高度重视。[0003]饲用酶制剂是从微生物、动物、植物中提取的具有酶特性的一类物质，其中微生物来源的酶制剂应用最为广泛。饲用酶制剂的种类很多，按照动物自身能否合成，可分为消化酶和非消化酶。消化酶指动物体内能够合成并分泌到消化道进行消化的酶类，也称内源酶，主要包括淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶；非消化酶指动物体自身通常不能合成酶类，也称外源酶，包括植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶等。按照酶制剂的类型来分，可分为单一酶制剂和复合酶制剂。根据酶的作用底物，可分为蛋白酶、脂肪酶、碳水化合物酶、植酸酶等。[0004]酶制剂应用于饲料中，最大的关注点是其稳定性