消除福沙匹坦双葡甲胺细菌内毒素检查干扰因素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107356462A(43)申请公布日2017.11.17(21)申请号201710471879.1(22)申请日2017.06.20(71)申请人齐鲁制药有限公司地址250100山东省济南市高新区新泺大街317号(72)发明人张吉增王红花谢海云(51)Int.Cl.G01N1/34(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称消除福沙匹坦双葡甲胺细菌内毒素检查干扰因素的方法(57)摘要本发明涉及一种消除福沙匹坦双葡甲胺细菌内毒素检查干扰因素的方法，主要利用干扰物质可以通过超滤离心管的滤膜，而内毒素被截留的原理，将干扰物质与内毒素分离，从而在不存在干扰的条件下，准确测定离心管内回收的内毒素。本发明的方法操作过程简单，易于控制，样品中内毒素的回收率高达50％以上。CN107356462ACN107356462A权利要求书1/2页1.一种消除福沙匹坦双葡甲胺细菌内毒素检查干扰因素的方法，包含如下步骤：(1)将样品溶液1ml～5ml加入超滤离心管中，设定离心机转速2000rpm～6000rpm，对样品溶液离心10min～50min；(2)向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入1ml～5ml无细菌内毒素的检查用水，以转速2000rpm～6000rpm，对样品溶液离心10min～50min；(3)重复步骤(2)2～5次，至样品中的干扰物质被充分洗脱。(4)最后向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入25℃～100℃无细菌内毒素的检查用水1ml～5ml，立即在漩涡混合器上混匀至少30秒，从而将超滤离心管内壁及滤膜上的细菌内毒素充分洗脱到检查用水中，得到无干扰因素的检测溶液；(5)将步骤(4)得到的无干扰因素的检测溶液立即移入无热原的玻璃试管中，做细菌内毒素检查，所得溶液的内毒素回收率达50％以上。2.根据权利要求1的方法，所述超滤离心管为sartorius、Millipore、Pall的超滤离心管，优选为sartoriusVivaspinTurbo4，所述超滤离心管截留分子量为10K～30K，优选为10K。3.根据权利要求1的方法，所述离心机转速优选为2000rpm～4000rpm，进一步优选为2000rpm。4.根据权利要求1的方法，所述步骤(3)中所述重复操作的次数根据每次离心后溶液的剩余量以及溶液中干扰物质的干扰能力进行选择，剩余量多或干扰能力强可以多离心几次，优选2～3次。5.根据权利要求1的方法，所述步骤(1)～(4)中所述样品溶液加入量和检查用水加入量为1ml～5ml。6.根据权利要求1的方法，所述步骤(1)～(3)中所述离心时间为10min～40min，更进一步优选为15min～20min。7.根据权利要求1的方法，所述步骤(4)中超滤离心管中加入检查用水的温度优选为50℃～100℃，更进一步优选为80℃～100℃。8.使用sartoriusTurbo4截留分子量10K的超滤离心管消除福沙匹坦双葡甲胺内毒素检查干扰因素的方法，包括：(1)将含有已知浓度标准内毒素的样品溶液2ml加入超滤离心管中，设定离心机转速2000rpm，对样品溶液离心20min；(2)向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入2ml无细菌内毒素的检查用水，以转速2000rpm，对样品溶液离心20min；(3)重复步骤(2)2次，至样品中的干扰物质被充分洗脱；(4)最后向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入80℃无细菌内毒素的检查用水2ml，立即在漩涡混合器上混匀至少30秒，回收超滤离心管内壁及滤膜上的细菌内毒素至检查用水中。(5)将步骤(4)得到的回收溶液立即移入无热原的玻璃试管中，做细菌内毒素检查。经检测，所得溶液的内毒素回收率为100％。9.使用sartoriusTurbo4截留分子量10K超滤离心管消除福沙匹坦双葡甲胺内毒素检查干扰因素的方法，包括：2CN107356462A权利要求书2/2页(1)将含有已知浓度标准内毒素的样品溶液2ml加入超滤离心管中，设定离心机转速2000rpm，对样品溶液离心15min；(2)向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入2ml无细菌内毒素的检查用水，以转速2000rpm，对样品溶液离心15min；(3)重复步骤(2)2次，至样品中的干扰物质被充分洗脱；(4)最后向离心后剩有少量溶液的超滤离心管中加入100℃无细菌内毒素的检查用水1ml，立即在漩涡混合器上混匀至少30秒，回收超滤离心管内壁及滤膜上的细菌内毒素至检查用水中。(5)将步骤(4)得到的回收溶液立即移入无热原的玻璃试管中，做细菌内毒素检查。经检测，所得溶液的内毒素回收率为100％。3CN107356462A说明书1/5页消除福沙匹坦双葡甲胺细菌内毒素检查干扰因素的方法技术领域