一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107688073A(43)申请公布日2018.02.13(21)申请号201711066602.7(22)申请日2017.11.02(71)申请人威海百合生物技术股份有限公司地址264321山东省威海市荣成市成山镇成大路552号(72)发明人肖水水张伟王丽娜(74)专利代理机构济南日新专利代理事务所37224代理人李蕾蕾(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图2页(54)发明名称一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法(57)摘要本发明公开了一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其解决现有检测方法存在保留时间过长、峰形不佳的问题。其经过以下步骤：（I）绘制标准曲线：准确称取磷脂酰丝氨酸标样配成标准溶液，随后使用梯度洗脱条件进行高效液相色谱分离；（II）将待测样品制备成适合进行高效液相色谱进样的液体样品；（III）使用梯度洗脱高效液相色谱来分离待测样品，所述的梯度洗脱条件和步骤I的梯度洗脱条件相同；（IV）随后使用蒸发光散射检测器记录峰面积，并且按照步骤I得到的拟合方程来得到样品中的磷脂酰丝氨酸浓度。本发明采用高效液相色谱配合蒸发光检测器为该原料或成品的检测提供了一个准确快速、灵敏度高的检测方法。CN107688073ACN107688073A权利要求书1/2页1.一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：其经过以下步骤：（I）绘制标准曲线：准确称取磷脂酰丝氨酸标样，并且溶于氯仿/甲醇溶液，配置成标准溶液，随后将4-10组梯度体积的标准溶液进行高效液相色谱分离，所述的梯度洗脱条件是：高效液相色谱柱为球形硅胶正相柱；柱温为30-40摄氏度；流动相A：正已烷、异丙醇、乙酸和三乙胺的体积比是810:160-200:8-12:0.6-0.10；流动相B：异丙醇、水、乙酸和三乙胺的体积比是860:110-130:8-12:0.6-0.10；在0-10分钟，流动相A和B的流速比为100:0；在10-15分钟，流动相A和B的流速比为60:50-30；在15-20分钟，流动相A和B的流速比为0:100；随后使用蒸发光散射检测器记录峰面积，并且将峰面积对各组样品的浓度做出标准曲线，拟合出一元一次方程，所述的氯仿/甲醇溶液的氯仿体积分数为85-95%；（II）将待测样品制备成适合进行高效液相色谱进样的液体样品；（III）使用梯度洗脱高效液相色谱来分离待测样品，所述的梯度洗脱条件和步骤I的梯度洗脱条件相同；（IV）随后使用蒸发光散射检测器记录峰面积，并且按照步骤I得到的拟合方程来得到样品中的磷脂酰丝氨酸浓度。2.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤I和III中，梯度洗脱条件为：高效液相色谱柱为球形硅胶正相柱；柱温为37摄氏度；流动相A：正已烷、异丙醇、乙酸和三乙胺的体积比是810:180:10:0.8；流动相B：异丙醇、水、乙酸和三乙胺的体积比是860:130:10:0.8；在0-10分钟，流动相A和B的流速比为100:0；在10-15分钟，流动相A和B的流速比为60:40；在15-20分钟，流动相A和B的流速比为0:100；在30分钟以后，流动相A和B的流速比为100:0。3.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤I中，准确称取120mg标样磷脂酰丝氨酸溶解于25mL的体积比为90/10的氯仿/甲醇的溶剂中配成标准溶液，超声使粉末充分溶解，置于4℃环境下保存，随后以10、15、20、25ul和30ul标准溶液进样，做出标准曲线，并且拟合出一元一次方程。4.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤I和III中，使用的色谱柱为4m×125mm的球形硅胶正相柱，流动相的流速为1.2mL/min。5.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤II中，所述的待测样品选自含磷脂酰丝氨酸的食品和保健品。6.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤II中，所述的待测样品选自配方奶粉、压片糖果和磷脂酰丝氨酸粗制品。7.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤II中，所述的待测样品按照以下的方法来制备成适合进行高效液相色谱进样的液体样品：准确的重复称取待测样品，研磨至细粉状态后加入到50ml的容量瓶中，加入10ml的体积比为90/10的氯仿/甲醇溶液，涡旋振荡分散均匀后，超声5min，冷却至室温,用氯仿/甲醇溶液补足至50mL，摇匀，经0.45um微孔滤膜过滤，得到适合进行高效液相色谱进样的液体样品。8.根据权利要求1所述的一种磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于：在步骤IV