一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108931595A(43)申请公布日2018.12.04(21)申请号201810639401.X(51)Int.Cl.(22)申请日2018.06.20G01N30/02(2006.01)G01N30/74(2006.01)(71)申请人广东省测试分析研究所（中国广州G01N30/34(2006.01)分析测试中心）地址510070广东省广州市越秀区先烈中路100号34号楼(72)发明人张飞郑家概张志军林晨王和平李圣男张志舟黄兴民刘军付强林奕云林钦恒夏冰蓝燕玲黄子荣钟永红高涛戴立威梁柳泳林嘉婷(74)专利代理机构广州科粤专利商标代理有限公司44001代理人方燕莫瑶江权利要求书1页说明书9页附图3页(54)发明名称一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法(57)摘要本发明涉及一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法。该方法包括以下步骤：(1)标准品溶液制备：制备磷脂酰丝氨酸标准品溶液；(2)供试品溶液制备：向经过预处理的供试品明胶型凝胶糖果中加入盐酸溶液，进行酸法水解，水解后冷却至室温，然后加入萃取剂进行萃取得到萃取液，将萃取液中的萃取剂吹干，用氯仿/甲醇溶液定容作为供试品溶液；(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定。本发明首次建立了一种适用于测定明胶型凝胶糖果中PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法，该方法针对性强、准确度高、重复性好、回收率高和检出限低。CN108931595ACN108931595A权利要求书1/1页1.一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准品溶液制备：制备磷脂酰丝氨酸标准品溶液；(2)供试品溶液制备：向经过预处理的供试品明胶型凝胶糖果中加入浓度为1.0～5.0mol/L的盐酸溶液，摇匀后置于恒温水浴摇床中50℃～70℃水解10～50min，水解后冷却至室温，然后向冷却后的水解溶液中加入萃取剂进行萃取得到萃取液，将萃取液中的萃取剂吹干，用氯仿/甲醇溶液定容作为供试品溶液；(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对步骤(2)得到的供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定。2.根据权利要求1所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(3)中非正己烷正相高效液相色谱条件为：色谱柱：硅胶柱，尺寸为4.6mm×250mm×5μm，流动相A：正己烷：异丙醇：乙酸：三乙胺的体积比为83:17:1.5:0.08，流动相B：异丙醇：水：乙酸：三乙胺的体积比为85:15:1.5:0.08或流动相C：水：乙酸：三乙胺的体积比为100:1.5:0.08，流动相流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；蒸发光散射检测器条件为：漂移管温度：90℃～110℃；载气为氮气，载气流速：1.5～3.5L/min。3.根据权利要求1所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的供试品明胶型凝胶糖果的预处理的具体步骤是：将明胶型凝胶糖果剪碎，再使用研钵将剪碎后的明胶型凝胶糖果挤压研磨成均匀的粘稠状备用。4.根据权利要求1或2所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中供试品溶液的具体制备步骤是：(a)称取经过预处理的供试品于离心管中，加入浓度为1.0～5.0mol/L盐酸溶液，混匀后，水平置于50℃～70℃的恒温水浴摇床水解10～50min后冷却至室温；(b)向上述溶液中加入石油醚，振摇萃取5min后，4000r/min离心5min，移出上层石油醚溶液；再重复萃取下层一次，合并两次萃取后的石油醚溶液；(c)用氮气吹干合并的石油醚溶液中的石油醚，用氯仿/甲醇溶液对其定容作为供试品溶液。5.根据权利要求4所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(a)具体的步骤为：称取经过预处理的供试品1.5g于离心管中，加入摩尔浓度为1.8mol/L盐酸溶液20mL，混匀后，水平置于60℃的恒温水浴摇床水解17min后冷却至室温。6.根据权利要求1所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，所述的氯仿/甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为90:10。2CN108931595A说明书1/9页一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法技术领域[0001]本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法。背景技术[0002]磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，以下简称PS)是一种酸性磷脂，又称复合神经酸或丝氨酸磷脂。PS由三部分组成：亲水性的甘油骨架为