一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108402471A(43)申请公布日2018.08.17(21)申请号201810294362.4(22)申请日2018.04.04(71)申请人吉林大学地址130012吉林省长春市前进大街2699号(72)发明人毕景硕王昕周亚军(74)专利代理机构长春吉大专利代理有限责任公司22201代理人朱世林张晶(51)Int.Cl.A23L33/165(2016.01)A23L33/18(2016.01)A23J3/34(2006.01)权利要求书3页说明书6页附图1页(54)发明名称一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法(57)摘要本发明属于功能性食品加工领域，涉及一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法，包括以下步骤：步骤一：使用蛋白酶酶解畜禽骨粉，得到含胶原多肽的畜禽骨粉酶解液；步骤二：使用步骤一所得畜禽骨粉酶解液与氯化钙溶液混合，进行螯合反应；步骤三：将步骤二所得螯合反应产物用截留分子量为500Da的滤膜透析24h，反应产物冷冻干燥，得畜禽骨胶原多肽螯合钙粉；或将步骤二所得螯合反应产物冷冻干燥，50倍重量的无水乙醇洗涤，离心，收集沉淀，无水乙醇溶液洗涤，再次收集沉淀冷冻干燥，得畜禽骨胶原多肽螯合钙粉；本发明的积极效果在于，可同时补充氨基酸和钙营养元素；促进解决新型钙营养强化剂短缺的问题；开发了高附加值的畜禽骨骼产品。CN108402471ACN108402471A权利要求书1/3页1.一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：使用一种或一种以上蛋白酶酶解畜禽骨粉，得到含胶原多肽的畜禽骨粉酶解液；步骤二：使用步骤一所得含胶原多肽的畜禽骨粉酶解液与氯化钙溶液混合，进行螯合反应；步骤三：将步骤二所得螯合反应产物用截留分子量为500Da的滤膜透析，透析时间为24h，以去除反应体系中的游离钙离子，将反应产物冷冻干燥，得畜禽骨胶原多肽螯合钙粉；或者，将步骤二所得螯合反应产物冷冻干燥得反应产物冻干粉，使用50倍重量的无水乙醇溶液洗涤反应产物冻干粉，离心，收集沉淀，再次使用无水乙醇溶液洗涤，收集相同条件下离心所得沉淀冷冻干燥，得畜禽骨胶原多肽螯合钙粉。2.根据权利要求1所述的一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法，其特征在于：步骤一中运用蛋白酶酶解畜禽骨粉的最优工艺条件，以获得最优的酶解效果；蛋白酶酶解畜禽骨粉的最优工艺条件：影响蛋白酶酶解的主要因素包括：酶浓度、反应温度、底物浓度、反应时间和反应pH值；通过单因素试验和试验优化设计的方法，以蛋白酶酶解的水解度和蛋白酶酶解液的钙结合活性为指标，确定酶解畜禽骨粉最适的酶浓度、反应温度、底物浓度、反应时间、反应pH值；水解度的测定：甲醛滴定法，样品中总蛋白质的含量用凯氏定氮法测定；钙结合活性分析：将蛋白酶酶解反应所得的蛋白酶酶解液冷冻干燥，得蛋白酶酶解冻干粉；500mg/L的蛋白酶酶解冻干粉与5mMCaCl2和20mM磷酸钠缓冲液进行混合，调节混合物pH值为7.8，在22℃条件下搅拌30min，反应结束后，使用0.45μm的微孔滤膜过滤去不溶性磷酸钙盐后，上清液中的钙含量用火焰原子吸收光谱法测定；钙结合活性用每克蛋白质结合钙离子的毫摩尔数表示，单位为mmol钙/g蛋白质。步骤二中运用螯合反应的最优反应条件，以获得最优的螯合反应效果；螯合反应的最优反应条件：将蛋白酶酶解反应所得的蛋白酶酶解液冷冻干燥，得蛋白酶酶解冻干粉；影响螯合反应的主要因素包括：蛋白酶酶解冻干粉浓度、钙离子浓度、反应体系pH值、反应温度和反应时间五个因素；通过单因素试验和试验优化设计的方法，以螯合率和肽结合钙量为指标，确定最适的蛋白酶酶解冻干粉浓度、钙离子浓度、反应体系pH值、反应温度和反应时间；肽结合钙量和螯合率两个指标参照如下公式计算：Cb＝(ωt-ωf)/ωpt······················(1-1)Cb：肽结合钙量，单位：mmol/g；ωt：总钙质量，单位：g；ωf：游离钙质量，单位：g；ωpt：蛋白酶酶解冻干粉质量；Cr＝(ωt-ωf)/ωt×100％················(1-2)Cr：螯合率(％)；ωt：总钙质量，单位：g；2CN108402471A权利要求书2/3页ωf：游离钙质量，单位：g。3.根据权利要求1所述的一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法，其特征在于：步骤一中蛋白酶酶解反应体系pH值和步骤二中螯合反应体系pH值所用的酸碱缓冲溶液为HCl和NaOH缓冲溶液。4.根据权利要求1所述的一种畜禽骨胶原多肽螯合钙的制备方法，其特征在于：步骤一中所述畜禽骨粉的制备方法为：1)鲜畜禽骨初粉碎为5cm-10cm的小块；2)去除筋、皮、骨髓和上面少量的肉；3)洗净沥干；4)高压锅或高压反应釜中在大于80k