一种核酸提取试剂盒及其应用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108624586A(43)申请公布日2018.10.09(21)申请号201810240821.0(22)申请日2018.03.22(71)申请人重庆中元汇吉生物技术有限公司地址400000重庆市大渡口区建桥工业园C区泰康路6号30栋第1-4层(72)发明人陈威刘松林(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图8页(54)发明名称一种核酸提取试剂盒及其应用方法(57)摘要本发明提供了一种核酸提取的试剂盒，包括裂解结合液，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液，其中的裂解结合液包括0.5％-2％的脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸钠和3％-5％的磁珠，在其中的洗涤缓冲液中加入了少量硅油，减少了整个核酸提取的时间，减少了废液的残留，提高了核酸提取纯化的效果，同时也提高了核酸检测的精密度以及灵敏度。CN108624586ACN108624586A权利要求书1/1页1.一种用于核酸提取的试剂盒，包括裂解结合液，洗涤缓冲液和洗脱缓冲液，其特征在于：所述裂解结合液包括0.5％～2％的脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸钠和3％-5％的磁珠，优选的，所述裂解结合液包括1％的脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸钠，优选的，所述裂解结合液包括4％的磁珠，更优选的，所述磁珠为100-1000nm的超顺磁性羧基氧化硅纳米微球。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的裂解结合液还包括如下成分：异硫氰酸胍或盐酸胍1～5M，乙酸钠或乙酸钾1～5M，乙基苯基聚乙二醇1％～3％，蛋白酶K10％～20％，所述裂解结合液的PH值为7.0～9.0，优选的，所述的裂解结合液还包括如下成分：异硫氰酸胍或盐酸胍4M，乙酸钠或乙酸钾2M，乙基苯基聚乙二醇1.5％，蛋白酶K15％，所述裂解结合液的PH值为8.0。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括硅油。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的洗涤缓冲液还包括如下成分：碘化钠或碘化钾1～10mM，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10～50mM，乙醇75％，所述洗涤缓冲液的PH值为5.0～7.0，优选的，所述的洗涤缓冲液还包括如下成分：碘化钠或碘化钾5M，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐40mM，乙醇75％，所述洗涤缓冲液的PH值为6.0。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的洗脱缓冲液包括如下成分：乙二胺四乙酸1-5mM，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10-50mM，所述洗脱缓冲液的PH值为7.4-8.0，优选的，所述的洗脱缓冲液包括如下成分：乙二胺四乙酸1mM，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐10mM，所述洗脱缓冲液的PH值为8.0。6.一种采用如权利要求1-5任意一项所述的试剂盒提取核酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：①在生物样品中加入如权利要求1或2所述的裂解结合液，在25-60℃下裂解2-10min，在外部磁场作用下，纳米磁珠聚集，形成磁珠-核酸复合物；②向磁珠-核酸复合物中加入如权利要求4所述的洗涤缓冲液，再加入硅油，洗涤除去磁珠-核酸复合物上附带的杂质；③在进行洗涤后的磁珠-核酸复合物中加入如权利要求5所述的洗脱缓冲液，在60-90℃下洗脱1-5min，即得到提取的核酸，优选的，在进行洗涤后的磁珠-核酸复合物中加入如权利要求5所述的洗脱缓冲液，在80℃下洗脱2min。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的生物样品包括细胞、菌液、全血、动物组织匀浆液、植物组织匀浆液、血清、血浆、组织提取液、拭子洗液、尿液、病毒培养液。8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤①中的具体步骤为：在生物样品中加入如权利要求1或2所述的裂解结合液，在55℃下裂解4min，在外部磁场作用下，纳米磁珠聚集，形成磁珠-核酸复合物。9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤①中所述生物样品与裂解结合液的体积比为1:1-1:5，优选的，步骤①中所述生物样品与裂解结合液的体积比为1:2.5。10.如权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤②中所述的硅油与裂解结合液的体积比为：1:5-2:5，优选的，步骤②中所述的硅油与裂解结合液的体积比3:10。2CN108624586A说明书1/11页一种核酸提取试剂盒及其应用方法技术领域[0001]本发明设计生物技术领域，具体的，本发明涉及磁珠提取核酸的方法。背景技术[0002]核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)，起着储存和传递遗传信息的作用。[0003]随着基因检测、个性化用药、产前诊断等的普及，高通量测序、荧光定量PCR、基因芯片等以核酸为检测对象的分子生物学技术的应用越来越广泛。核酸检测的关键环节之一，即从各