一种检测邻苯基苯酚的免疫胶体金检测卡及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109752534A(43)申请公布日2019.05.14(21)申请号201711073707.5(22)申请日2017.11.05(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人洪霞张淑雅立雯馨(51)Int.Cl.G01N33/558(2006.01)G01N33/532(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种检测邻苯基苯酚的免疫胶体金检测卡及其制备方法(57)摘要本发明邻苯基苯酚的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含邻苯基苯酚单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有邻苯基苯酚蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测邻苯基苯酚，方便、快捷、结果准确。CN109752534ACN109752534A权利要求书1/1页1.邻苯基苯酚胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；(2)抗体的预处理：将要标记的邻苯基苯酚抗体在1000r/min，4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温1500r/min离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成邻苯基苯酚单克隆抗体胶体金标记物；(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)邻苯基苯酚蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5µL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含邻苯基苯酚蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、邻苯基苯酚蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1µL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2.根据权利要求1所述的邻苯基苯酚胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方；所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白(BSA)和0.8g氯化钠(NaCl)，用含有0.5%TRITON-100的0.01mol/LPBS定容至100mL。2CN109752534A说明书1/3页一种检测邻苯基苯酚的免疫胶体金检测卡及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及邻苯基苯酚的免疫胶体金检测卡及其制备方法。背景技术[0002]食品安全卫生关系到人类的生命和健康，引起了国际社会的广泛关注。随着食品生产自然方式的减少，工业化比重的增加，食品被人们故意或非故意污染的机会正逐渐增加，而且随着国际贸易的日益发达，食品污染扩散的速度之快、范围之广、危害之大，也是前所未有的。现在的果蔬保鲜贮藏技术，主要是依靠适宜的低温和空气调节，但在果蔬贮藏期间它们能够承受的温使用度和气体条件下，控制不住霉菌的生长；另外果蔬保鲜贮藏需要的较高湿度，正式霉菌生长的良好条件，因此在果蔬保鲜中使用防腐剂是必不可少的。防腐剂不但对果蔬保鲜有利，而且它也可控制产生霉菌，从而使人们免受霉菌毒素的侵害。[0003]防腐剂的使用对食品贮藏具有重要意义。但在食品中使用化学品难免让人们担心，防腐剂能杀菌，同时对人体也有害处。人们对于在食品中使用化学品