一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109750073A(43)申请公布日2019.05.14(21)申请号201910149167.7(22)申请日2015.10.30(62)分案原申请数据201510720495.X2015.10.30(71)申请人江苏理工学院地址213001江苏省常州市钟楼区中吴大道1801号(72)发明人梁国斌汪斌(74)专利代理机构常州市江海阳光知识产权代理有限公司32214代理人孙培英(51)Int.Cl.C12P21/02(2006.01)C07K5/037(2006.01)C12R1/72(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法(57)摘要本发明公开了一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法，包括以下步骤：产朊假丝酵母种子培养和发酵；收集发酵培养完毕的发酵液，离心，收集的细胞冷冻；将冷冻后的产朊假丝酵母细胞加入硫酸溶液中，放置15～30分钟后离心分离，收集上清液；此时细胞内的还原型谷胱甘肽从胞内释放出来溶解在硫酸溶液中，完成提取。本发明将收集的细胞冷冻处理以增加细胞壁渗透性；将冷冻处理后的细胞加入强酸溶液中，在强酸溶液中胞内还原型谷胱甘肽完全释放出来，而胞内其他大分子物质如蛋白质、糖类、核酸等则基本留在胞内，简化了后续的纯化操作，降低了纯化成本，实现了高效、清洁化提取；同时在本发明的提取条件下还原型谷胱甘肽未被破坏。CN109750073ACN109750073A权利要求书1/1页1.一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法，其特征在于包括以下步骤：①产朊假丝酵母种子培养和发酵；将产朊假丝酵母菌株接种于种子培养基中，28℃～32℃下培养18～28小时，摇床转速200～250rpm，培养至对数期时停止培养，得到的种子液待发酵培养；②收集步骤①发酵培养完毕的产朊假丝酵母发酵液，离心后去除上清液，收集的细胞在-15℃～-25℃下冷冻20～30分钟；③将步骤②冷冻后的产朊假丝酵母细胞加入硫酸溶液中，硫酸溶液中产朊假丝酵母细胞的浓度为0.08g/mL～0.12g/mL，硫酸溶液的pH值为1～2，20℃～35℃下放置15～30分钟后,产朊假丝酵母细胞内的还原型谷胱甘肽从胞内释放出来溶解在硫酸溶液中，完成从产朊假丝酵母发酵液中对谷胱甘肽的提取，离心分离，收集上清液。2.根据权利要求1所述的从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤①产朊假丝酵母发酵时，先将种子液按8%～10%的接种量接种在发酵基本培养基中分批培养8～10h，再按照细胞比生长速率0.15h-1～0.25h-1指数流加培养11～13h，接着以5.0～6.0g（h﹒L）-1恒数流加培养23～25h后；向罐内加入三种氨基酸，加入后罐内谷氨酸5.5～6.5mmol/L、甘氨酸5.0～6.0mmol/L、半胱氨酸6.0～7.0mmol/L，继续培养25～35h完成产朊假丝酵母的发酵培养。3.根据权利要求2所述的从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法，其特征在于：分批培养时所述发酵基本培养基组成为：葡萄糖15g/L，硫酸铵5g/L，酵母膏2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.25g/L，发酵基本培养基的pH值为5.5；指数流加培养和恒数流加培养所用的均为流加培养基，流加培养基组成如下：葡萄糖500g/L，硫酸铵36g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁0.5g/L，其中葡萄糖单独灭菌后与其它成分混合。2CN109750073A说明书1/4页一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法[0001]本申请是申请号为201510720495.X，申请日为2015年10月30日，发明创造名称为“从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法”的发明专利申请的分案申请。技术领域[0002]本发明涉及一种谷胱甘肽的制备方法，具体涉及一种从产朊假丝酵母发酵液中提取谷胱甘肽的方法。背景技术[0003]谷胱甘肽，即γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸，是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的一种同时具有γ-谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物。作为生物体内的非蛋白巯基化合物，谷胱甘肽主要有还原型(G-SH)和氧化型(G-S-S-G)两种形态，在机体中大量存在并起主要作用的是还原型谷胱甘肽。还原型谷胱甘肽具有独特的生理功能，被称为长寿因子和抗衰老因子。还原型谷胱甘肽作为氨基酸类生化药物，可用于治疗肝病、重金属中毒等疾病，最近发现还原型谷胱甘肽还具有抗爱滋病毒功效。[0004]目前生产还原型谷胱甘肽的主要方法是发酵法，即以廉价的糖类等原料为营养物质，利用微生物体内物质和能量代谢途径来进行还原型谷胱甘肽生物合成的方法。一般情况下微生物细胞中还原型