一种阿维菌素菌株及其筛选方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109868239A(43)申请公布日2019.06.11(21)申请号201910160954.1C12N15/01(2006.01)(22)申请日2019.03.04C12R1/465(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.171572019.01.10(71)申请人内蒙古新威远生物化工有限公司地址014300内蒙古自治区鄂尔多斯市达拉特旗新奥工业园区(72)发明人高鹤永李军华郑智新刘文彬(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人刘先荣(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)C12N1/36(2006.01)C12N13/00(2006.01)权利要求书1页说明书9页(54)发明名称一种阿维菌素菌株及其筛选方法(57)摘要本发明公开了一种阿维菌素菌株及其筛选方法，该菌株分类命名为除虫链霉菌，分类命名的拉丁文名称为Streptomycesavermitilis，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17157，保藏日期为2019年1月10日。其筛选方法包括孢子悬液的准备；孢子悬液在氯化锂溶液中复合诱变然后经过紫外灯照射诱变，然后将NTG加入到经紫外光-氯化锂处理过的菌液中，终止反应；平板、斜面培养；摇床培养筛选；最终获得菌株。该菌株适用、利用废水中残留营养物质和有机酸但不影响发酵罐的放罐效价，也可以减少发酵用自来水和板框废水的排放量。CN109868239ACN109868239A权利要求书1/1页1.一种阿维菌素菌株，其特征是，该菌株分类命名为除虫链霉菌，分类命名的拉丁文名称为Streptomycesavermitilis，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17157，保藏日期为2019年1月10日。2.一种权利要求1所述的阿维菌素菌株的筛选方法，其特征包括以下步骤：(1)萌发的孢子悬液的制备：取阿维菌素菌孢子斜面放置于无菌水中，得孢子悬液，将孢子悬液培养，得萌发的孢子悬液；(2)萌发的孢子悬液复合诱变：取萌发的孢子悬液，加入到氯化锂溶液中，置于紫外灯下照射，然后加入NTG，然后加入生理盐水，得诱变菌液；(3)平板、斜面培养：吸取诱变菌液，稀释105-106倍后，取稀释液涂在含有板框废水的平板培养基上培养，然后加入至斜面培养基中培养，得种子液；(4)摇床培养筛选：将种子液接入种子摇瓶培养基培养，然后转入发酵摇瓶培养基培养；发酵后筛选，得菌株。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤(4)得到菌株后，进行菌株的反复传代复壮。4.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中，将孢子悬液在100r/min，温度28-28.5℃条件下培养1.5-2h；步骤(2)中，氯化锂溶液质量浓度为0.3-0.5％，置于紫外灯下30-35cm照射，紫外灯功率为30W。5.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，平板培养基由葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、FeSO4·7H2O、琼脂粉、板框废水、水组成，pH＝7.2；优选为，按重量份计，平板培养基由葡萄糖0.6％、酵母膏0.15％、蛋白胨0.15％、牛肉膏0.1％、FeSO4·7H2O0.001％、琼脂粉2％、板框废水30％、水余量组成。6.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，斜面培养基由葡萄糖、酵母膏、天冬氨酸、牛肉膏、KH2PO4.3H2O、琼脂粉、板框废水、水组成，pH＝7.2；优选为，按重量份计，斜面培养基由葡萄糖2％、酵母膏0.15％、天冬氨酸0.1％、牛肉膏0.2％、KH2PO4·3H2O0.06％、琼脂粉2％、板框废水30％、水余量组成。7.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(4)中，种子摇瓶培养基由玉米淀粉、黄豆饼粉、花生饼粉、酵母粉、淀粉酶、水组成，pH＝7.0-7.2；优选为，按重量份计，种子摇瓶培养基由玉米淀粉3％、黄豆饼粉2.5％、花生饼粉0.65％、酵母粉0.3％、淀粉酶0.0025％、水余量组成。8.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(4)中，发酵摇瓶培养基由玉米淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、酵母膏、CoCl2·6H2O、碳酸钙、硫酸铵、硫酸锰、钼酸钠、淀粉酶、水组成，pH＝7.0-7.2；优选为，按重量份计，发酵摇瓶培养基由玉米淀粉14％、黄豆饼粉2.5％、酵母粉1.0％、酵母膏3.0％、CoCl2·6H2O0.003％、碳酸钙1.0％、硫酸铵0.03％、硫酸锰0.0002％、钼酸钠0.002％、淀粉酶0.0025％、水余量组成。9.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，