一种阿维菌素B1a高产菌株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102634471A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102634471A(43)申请公布日2012.08.15(21)申请号201210113850.3(51)Int.Cl.(22)申请日2012.04.18C12N1/20(2006.01)C12P19/62(2006.01)(83)生物保藏信息C12R1/465(2006.01)CCTCCNO:M20120942012.04.08(71)申请人南京工业大学地址211300江苏省南京市高淳县淳溪镇宝塔路142号(72)发明人虞龙龚文静崔莉黄思思陈晓双(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人李纪昌权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书99页页附图附图33页(54)发明名称一种阿维菌素B1a高产菌株及其应用(57)摘要本发明公开了一种阿维菌素B1a高产菌株，其分类命名为阿维链霉菌streptomycesavermitilisAVE07-N2-16515，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCCNO：M2012094，本发明以低能氮离子注入-氯化锂(N+-LiCl)复合诱变结合紫外线-氯化锂(UV-LiCl)复合诱变，通过初筛、摇瓶发酵复筛选获阿维菌素B1a产量高的菌株作为下一轮诱变的出发菌株，最终筛选出目标菌株AVE07-N2-16515，该菌株可较大幅度提高发酵产物中阿维菌素B1a组分并减少其他组分，且遗传稳定性良好。该菌株利用葡萄糖为速效碳源，玉米淀粉为迟效碳源，在5L发酵罐中发酵产阿维菌素B1a效价可达3048μg/mL，相对于原始出发菌株AVE07提高了23.4%，可应用于工业生产并大幅度提高发酵单位，具有重大的经济应用价值。CN1026347ACN102634471A权利要求书1/1页1.一种阿维菌素B1a高产菌株，其分类命名为阿维链霉菌（streptomycesavermitilis）AVE07-N2-16515，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCCNO：M2012094。2.权利要求1所述的阿维菌素B1a高产菌株在发酵生产阿维菌素B1a中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的发酵生产阿维菌素B1a的方法包含如下步骤：(1)、平板培养：将阿维链霉菌AVE07-N2-16515接种于平板培养基上，培养温度为26~30℃，培养时间为6~7d；(2)、斜面培养：将步骤(1)平板培养的阿维链霉菌AVE07-N2-16515接种到斜面培养基上，培养温度为26~30℃，培养时间为6~7d；(3)、种子培养：将步骤(2)斜面培养的阿维链霉菌AVE07-N2-16515接种到种子培养基中，250mL培养瓶中装液量为20~50mL，培养温度为26~30℃，180~220rpm摇床转速下培养30~45h；(4)、发酵培养：将步骤(3)中的种子培养液接种到发酵培养基中，接种量为2~10%(v/v)，250mL培养瓶中装液量为35~65mL，培养温度为26~30℃，180~240rpm摇床转速下培养8~10d。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述平板培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.5%~1.5%、氮源0.1%~0.3%、无机盐0.5%~1.0%、琼脂1.2%~1.8%、其余为水，pH7.2~7.4；其中所述碳源为葡萄糖和可溶性淀粉中的一种或两种的混合；所述氮源为乙酸铵和硫酸铵中的一种或两种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或几种的混合。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.5%~1.5%、氮源0.1%~0.3%、无机盐0.5%~1.0%、琼脂1.2%~1.8%、其余为水，pH7.2~7.4；其中所述碳源为葡萄糖和可溶性淀粉中的一种或两种的混合；所述氮源为乙酸铵和硫酸铵中的一种或两种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、钙盐中的一种或几种的混合。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述种子培养基包含如下质量百分数的组分：碳源2.0%~3.0%、氮源2.0%~4.0%、微量元素0.0001%~0.0004%，淀粉酶3~5u/g淀粉，其余为水，pH7.0~7.2；其中所述碳源为玉米淀粉和葡萄糖中的一种或两种的混合；所述氮源为花生饼粉、黄豆饼粉、玉米浆、酵母粉和酵母膏中的一种或几种的混合；所述的微量元素为氯化钴。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源5.0%~15.0%、氮源2.0%~4.0%、微量元素0.0001%~0.0004%，淀粉酶3~5u/g淀粉，其余为水，pH7.0~7.2；其中所述碳源为玉米淀粉、葡萄糖和麦芽糖中