一种林蛙油抗氧化肽组分的制备方法及其分离方法与用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110042138A(43)申请公布日2019.07.23(21)申请号201910284427.1A61K47/46(2006.01)(22)申请日2019.04.10A61P39/06(2006.01)(71)申请人常熟理工学院地址215500江苏省苏州市常熟市南三环路99号(72)发明人张扬王逸飞李明珠刘舒悦于佳璐(74)专利代理机构常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙)32231代理人滕诣迪(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)A61K38/01(2006.01)A61K9/08(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图2页(54)发明名称一种林蛙油抗氧化肽组分的制备方法及其分离方法与用途(57)摘要本发明提供一种抗氧化肽组分的制备方法及其在口服液体制剂方面的应用。胃蛋白酶/胰蛋白酶分步水解法制备林蛙油抗氧化肽组分的工艺条件为：胃蛋白酶量2.0％、胃蛋白酶酶解时间3.5h、胰蛋白酶量2.0％、胰蛋白酶酶解时间3.0h。该条件下，林蛙油抗氧化肽组分对羟基自由基的清除率为75.57％，得率为63.45％。经超滤系统，截留分子量1kDa～3kDa的肽组分，即得活性最高的林蛙油抗氧化肽组分Ⅳ。该肽组分在乙醇诱导氧化损伤模型鼠体内具有显著的抗氧化作用，可降低丙二醛和蛋白质羰基含量，升高总超氧化物歧化酶活力及谷胱甘肽含量；可用于林蛙油抗氧化肽组分口服液的制备。CN110042138ACN110042138A权利要求书1/1页1.一种林蛙油抗氧化肽组分的制备方法，其特征在于：以林蛙油脱脂粉为原料，首先采用胃蛋白酶在酸性条件酶解，然后采用胰蛋白酶在碱性条件下酶解，酶解液经灭菌、离心、冷冻干燥得林蛙油抗氧化肽组分。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：具体包括如下步骤：称取一定量林蛙油脱脂粉末，置于蒸馏水中静止过夜；用盐酸调pH至1.0～1.5后置于水浴锅孵育；加入一定量胃蛋白酶，搅拌使其分散均匀，置于恒温振荡器中于30-40℃震荡一定时间；胃蛋白酶酶解结束后，用NaOH溶液调节pH至8.0～8.5后置于30-40℃水浴处理，加入一定量的胰蛋白酶，搅拌使其分散均匀，放入恒温振荡器中振荡酶解一定时间；胰蛋白酶酶解结束后，将酶解液置于90℃～100℃水浴中灭酶，冷却后离心，上清液冷冻干燥后即得林蛙油抗氧化肽组分。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述胃蛋白酶的加入量为林蛙油脱脂粉末重量的1.0％～3.0％，优选2.0％。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述胃蛋白酶的酶解时间为1.5h～4h，优选3.5h。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶的加入量为林蛙油脱脂粉末重量的1.0％～3.0％，优选2.0％。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶的酶解时间为1.5h～4h，优选3h。7.根据权利要求3-6任一项所述的制备方法，其特征在于：所述胃蛋白酶用量为林蛙油脱脂粉末重量的2.0％，胃蛋白酶酶解时间3.5h；胰蛋白酶用量为林蛙油脱脂粉末重量的2.0％，胰蛋白酶酶解时间3.0h。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：还包括对制备出的林蛙油抗氧化肽组分利用超滤系统对林蛙油抗氧化肽组分进行分离的工序；具体方法为：采用超滤系统，分别采用截留分子量分别为10kDa、5kDa、3kDa和1kDa的超滤膜对林蛙油抗氧化肽组分溶液进行分级分离，分别收集不同分子量的组分林蛙油抗氧化肽组分I、林蛙油抗氧化肽组分II、林蛙油抗氧化肽组分III、林蛙油抗氧化肽组分IV、林蛙油抗氧化肽组分V，冷冻干燥；所述林蛙油抗氧化肽组分I的分子量>10kDa，所述林蛙油抗氧化肽组分II的分子量为5kDa～10kDa，所述林蛙油抗氧化肽组分III的分子量为3kDa～5kDa，所述林蛙油抗氧化肽组分IV的分子量为1kDa～3kDa，所述林蛙油抗氧化肽组分V的分子量<1kDa。9.一种权利要求8所述制备方法制备出的林蛙油抗氧化肽组分IV的用途，其特征在于：用于制备口服液体制剂；所述口服液体制剂包括林蛙油抗氧化肽组分Ⅳ、矫味剂、防腐剂和水；按重量比计算，林蛙油抗氧化肽组分Ⅳ：矫味剂：防腐剂＝200～50:10～30:1～5。10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述矫味剂为三氯蔗糖、蔗糖、木糖醇、橙皮糖浆、樱桃糖浆、枸橼糖浆、桂皮糖浆、甘草糖浆或甜菊苷其中一种；或重量比为木糖醇：甘草糖浆＝1～2:3～5、甘草糖浆：樱桃糖浆＝3～4:1～2、木糖醇：甘草糖浆：樱桃糖浆＝1～2:2～5:2～3的复配；所述防腐剂为丙酸杆菌素、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙、尼