一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110045052A(43)申请公布日2019.07.23(21)申请号201910331600.9(22)申请日2019.04.24(71)申请人山东省食品药品检验研究院地址250101山东省济南市高新区新泺大街2749号药品检验大楼1-101(72)发明人赵发董瑞于文江刘艳明张喜琦张寒霜韩晓晓(74)专利代理机构北京元本知识产权代理事务所11308代理人岳秀梅(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图3页(54)发明名称一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法(57)摘要本发明公开了一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，(1)配制标准储备液和标准工作溶液；(2)配制蛋白酶提取液；(3)制备样品提取溶液；(4)制备样品加标溶液；(5)配置两种不同浓度的碳酸铵溶液作为流动相；(6)将标准工作溶液通过自动进样器注入高效液相色谱仪中，采用梯度洗脱的方式对11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行分析，得到每种砷物种的标准曲线；(7)采用梯度洗脱的方式对样品提取溶液和样品加标溶液中11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行检测，采用保留时间匹配和样品加标匹配相结合的方法，确定样品中砷形态的种类和含量。CN110045052ACN110045052A权利要求书1/2页1.一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以砷甜菜碱、二甲基砷、亚砷酸、砷胆碱、一甲基砷、砷酸、4-硝基苯基胂酸、洛克沙砷、阿散酸、卡巴胂、对羟基苯胂酸的标准物质混合配制标准储备液，将标准储备液稀释成不同浓度梯度的标准工作溶液；(2)配制提取液，称取4㎎蛋白酶溶解于0.75mL0.5％HCl；(3)剪掉虾头和虾尾，剥除虾壳，挑去虾线，将剩余的虾肉组织匀浆，称取匀浆后的样品0.5g于15mL的塑料离心管中，加入0.75mL提取液，用超纯水将样品定容至5mL，样品提取物涡旋，超声15min，将超声后的样品提取物置于恒温培养箱中37℃过夜，将样品提取物8000rpm离心，取上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到样品提取溶液；(4)称取匀浆后的样品0.5g于15mL的塑料离心管中，加入0.75mL提取液，并加入不同浓度梯度的标准工作溶液，用超纯水将样品定容至5mL，样品加标提取物涡旋，超声15min，将超声后的样品加标提取物置于恒温培养箱中37℃过夜，将样品加标提取物8000rpm离心，取上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到样品加标溶液；(5)配置两种不同浓度的碳酸铵溶液作为梯度洗脱的两种流动相；(6)将标准工作溶液通过自动进样器注入高效液相色谱仪中，以两种不同浓度的碳酸铵溶液为流动相，采用梯度洗脱的方式对11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行分析，确定11种砷形态的保留时间及其分离度的脉冲强度，以浓度为横坐标，脉冲强度的积分为纵坐标，由仪器的计算机作线性拟合，得到每种砷物种的标准曲线；(7)将样品提取溶液和样品加标溶液通过自动进样器注入高效液相色谱仪中，以两种不同浓度的碳酸铵溶液为流动相，采用梯度洗脱的方式对11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行检测，采用保留时间匹配和样品加标匹配相结合的方法，确定样品中砷形态的种类和含量。2.根据权利要求1所述的HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，其特征在于，电感耦合等离子质谱仪的设置条件为：射频功率1500W；停留时间0.2s；纯度为99.99％氩气作为雾化气、辅助气、等离子气，雾化气流速1.0mL/min，辅助气流速0.8mL/min，等离子气流速14mL/min；采用KED模式，纯度为99.99％的氦气作为碰撞气，碰撞气流速4.7mL/min。3.根据权利要求1所述的HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，其特征在于，步骤(5)中，两种流动相包括：流动相A为400mmol/L碳酸铵溶液；流动相B为5mmol/L碳酸铵溶液。4.根据权利要求3所述的HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，其特征在于，高效液相色谱仪的设置条件如下：选用阴离子交换柱AS7保护柱2×50mm，AS7分析柱2×50mm；流速0.4mL/min，进样体积为5μL，柱温为20℃；洗脱程序：0-2min，流动相A0％，流动相B100％；2.1-5.5min，流动相A10％，流动相B90％；5.6-8.6min，流动相A25％，流动相B75％；8.7-17m