一种血清淀粉样蛋白A突变体及其应用和制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110746499A(43)申请公布日2020.02.04(21)申请号201911191944.0C12R1/19(2006.01)(22)申请日2019.11.28(71)申请人宁波赛珀生物技术有限公司地址315033浙江省宁波市江北区长阳路191号029幢(72)发明人王民燕刘东海褚旭明夏杰王益栋李雪梅(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人王学芝(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C12N15/12(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图1页(54)发明名称一种血清淀粉样蛋白A突变体及其应用和制备方法(57)摘要本发明公开了一种血清淀粉样蛋白A突变体，所述突变体具有SEQIDNO.1所述的氨基酸序列，经过几个氨基酸的替换后仍具有血清淀粉样蛋白的抗原性，得到唯一的突变体。本发明通过对天然SAA蛋白中的4个氨基酸进行替换，得到SAA突变体，提高了其体外稳定性。实验证明，本发明所获得SAA蛋白为可溶的成熟蛋白，最大可能的保持了其活性，保留了天然SAA蛋白的抗原性。本发明还公开了该血清淀粉样蛋白A突变体的应用以及制备方法。CN110746499ACN110746499A权利要求书1/1页1.一种血清淀粉样蛋白A突变体，其特征在于：所述突变体具有SEQIDNO.1所述的氨基酸序列，经过几个氨基酸的替换后仍具有血清淀粉样蛋白的抗原性，得到唯一的突变体。2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A突变体，其特征在于：所述突变体具有SEQIDNO.1所述的氨基酸序列。3.一种血清淀粉样蛋白A突变体的基因，其特征在于：所述基因具有SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有SEQIDNO.1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的血清淀粉样蛋白A突变体的基因，其特征在于：所述基因具有SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。5.一种重组载体，其特征在于：所述载体含有如权利要求3所述的基因。6.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A突变体，在制备血清淀粉样蛋白A抗原中的应用。7.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A突变体，在血清淀粉样蛋白A检测试剂中标准曲线绘制中的应用。8.一种血清淀粉样蛋白A突变体的制备方法，包括以下步骤：1)血清淀粉样蛋白A突变体氨基酸序列的设计：根据NCBI网站公布的SAA蛋白的氨基酸序列以及该序列的特征，将第52位氨基酸由Ala替换为Val，第57位氨基酸由Val替换为Ala，第60位氨基酸由Asp替换为Asn，第71位氨基酸由His替换为Arg，获得SEQIDNO.1；2)血清淀粉样蛋白A突变体基因的优化和获得：采用大肠杆菌优势密码子对SEQIDNO.1进行优化，得到SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，通过退火延伸PCR技术，获得由大肠杆菌优势密码子组成的血清淀粉样蛋白突变体基因；3)血清淀粉样蛋白A突变体表达载体的构建：将步骤2)中获得的大肠杆菌的血清淀粉样蛋白突变体基因序列用NdeI和XhoI进行双酶切，与同样经过NheI和XhoI双酶切的pET-32a(+)载体进行连接，得到表达载体；4)血清淀粉样蛋白A突变体的表达纯化：将步骤3)中获得的表达载体转化大肠杆菌BL-21感受态细胞，得到血清淀粉样蛋白A突变体表达菌株，进行培养、诱导表达、纯化以及透析除盐，最终获得所述可溶性血清淀粉样蛋白A突变体。2CN110746499A说明书1/6页一种血清淀粉样蛋白A突变体及其应用和制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术技术领域，尤其是涉及一种血清淀粉样蛋白A突变体。本发明还涉及该突变体的应用和制备方法。背景技术[0002]血清淀粉样蛋白A(SerumAmyloidProteinA，SAA)是一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白，相对分子量约12000。肝内合成的SAA释放入血后，迅速与HDL结合。在体内的代谢主要通过血清、细胞表面及细胞内的蛋白酶降解，肝脏是其主要的降解场所。肝外细胞产生的SAA主要通过细胞间的黏附及内吞作用经细胞表面或细胞内的蛋白酶降解。SAA在各急性时相蛋白中反映最敏锐，疾病好转、康复，SAA首先下降并回归正常。近20年来全世界的临床研究均表明SAA也是一项疾病动态监测的优秀指标，对同一患者的同一疾病，相隔数天，SAA随疾病的变化波动会很大。SAA在疾病的治疗效果评价和预后评估上有较高的临床价值。[0003]目前，用于临床血清SAA检测的方法主要包括放射性免疫测定法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫速率散射比浊法、微球捕获酶免疫法(MEIA