人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113372429A(43)申请公布日2021.09.10(21)申请号202110252951.8(22)申请日2021.03.09(66)本国优先权数据202010159524.02020.03.09CN(71)申请人江苏金斯瑞生物科技有限公司地址212000江苏省镇江市镇江新区丁卯经十五路99号54号楼(72)发明人姚爱红杨浩万靖刘承张鑫(74)专利代理机构成都七星天知识产权代理有限公司51253代理人袁春晓(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C07K1/06(2006.01)C07K1/04(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图5页(54)发明名称人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法(57)摘要本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法。本发明提供的人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法，以Boc‑Ser(Fmoc‑Gly)‑OH为原料之一，按照人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的氨基酸序列制备26‑氧酰异Aβ1‑42，经酰基迁移得到人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42；该方法以侧链活性基团全保护的氨基酸为原料，降低了合成过程中发生副反应的几率；并且各步骤中，控制合成参数，从而提高了产物的收率，减少了副反应的发生。CN113372429ACN113372429A权利要求书1/1页1.人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法，其特征在于，包括：以Boc‑Ser(Fmoc‑Gly)‑OH为原料之一，按照人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的氨基酸序列制备26‑氧酰异Aβ1‑42，经酰基迁移得到人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42；偶联1～25位中任意氨基酸或多肽后，脱除Fmoc的步骤中采用8vol％～12vol％哌啶/DMF溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，偶联第41位氨基酸的步骤中，偶联剂为HATU/DIEA，或Pybop/DIEA。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在偶联32位和31位氨基酸或Boc‑Ser(Fmoc‑Gly)‑OH的偶联步骤中，依次以DIC/HOBt和HATU/HOBT/DIEA为偶联剂，进行两次偶联反应。4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，除第41位、32位、31位、25‑26位氨基酸外，其他偶联步骤的偶联剂选自DIC/HOBt、HATU/HOBT/DIEA、HBTU/HOBT/DIEA或PyBOP/HOBT/DIEA。5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，偶联第32位和第31位氨基酸的步骤中，氨基酸的投料量为5eq。6.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述偶联的溶剂选自DMF、CH2Cl2、NMP。7.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，偶联1～25位中任意氨基酸或多肽后，所述脱除Fmoc的条件为20～25℃，5min，脱除2次；偶联27～42位中任意氨基酸或多肽后，脱除Fmoc的试剂为20vol％哌啶/DMF溶液，条件为20～25℃，5～30min。8.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述合成为固相合成，其载体为CTC树脂或Wang树脂。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述固相合成后，切割树脂的裂解剂为苯甲硫醚、苯酚、EDT、碘化铵和水中的至少一种与TFA的混合液。10.根据权利要求1～9任一项所述的制备方法，其特征在于，所述酰基迁移为将26‑氧酰异Aβ1‑42溶解于乙腈水溶液中，以氨水调节pH值为7.4，25℃反应4小时，制得Aβ1‑42。2CN113372429A说明书1/12页人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法技术领域[0001]本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法。背景技术[0002]“阿尔茨海默症”(Alzheimerdisease)，简称AD，是与老龄化有关的、以大脑神经细胞广泛死亡为特点的疾病，其结果是大脑神经细胞逐渐丧失，最终造成记忆力、判断决策力、方位感、注意力和语言能力的损伤。近年来阿茨海默症发病率呈明显上升趋势，我国的发病率为0.71％，约有1000万阿尔茨海默症患者。预计到2050年，我国阿尔茨海默症患者人数将达2700万。由于阿尔茨海默症是与年龄密切相关的疾病，在65岁的人群中约有10％的人患病，而在85岁人群中则约有50％的人患病。[0003]阿尔茨海默症的病理特征主要包括大脑皮质和海马区域的细胞外出现以β‑淀粉样蛋白(beta‑amyloid,Aβ)为核心的老年斑、细胞内神经原纤维缠结等病变。Aβ是由淀粉样前体蛋白经β‑和γ‑分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39～43个基酸的多肽，Aβ