一种新型真皮基质脱细胞方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111437443A(43)申请公布日2020.07.24(21)申请号202010311429.8(22)申请日2020.04.20(71)申请人百澳瑞派（天津）生物科技有限公司地址301714天津市武清区河西务镇商业区10号212室-18（集中办公区）(72)发明人蒋彩云李志宏郭雅楠柏玮(74)专利代理机构天津盛理知识产权代理有限公司12209代理人刘丹舟(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种新型真皮基质脱细胞方法(57)摘要本发明涉及一种新型真皮基质脱细胞方法，全程采用含有结构稳定剂的溶液处理真皮，包括脱细胞前的浸泡、组织脱细胞、脱细胞后的清洗，包括⑴将真皮基质置于含结构稳定剂的PBS缓冲液中，2-8℃，200-500Pa低压浸泡20min-2h；⑵将真皮基质置于含有结构稳定剂的脱细胞溶液中，2-8℃，80-200rpm震荡处理4-6h；⑶将真皮基质置于含有结构稳定剂的脱细胞溶液中，2-4℃，超声高压处理30-60min；超声功率20-40Hz，压强为200-500MPa。结构稳定剂包括丝素蛋白、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、蔗糖中的两种或三种。本发明的脱细胞方法制备的真皮基质，外观更为柔软有韧性，且热稳定性、机械性能和生物活性成分保留量均有所提高，增加了材料的亲水性和细胞亲和性，能够诱导细胞长入。CN111437443ACN111437443A权利要求书1/1页1.一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：包括以下步骤：⑴脱细胞前结构稳定剂的浸泡：a含结构稳定剂的PBS缓冲液的配制：将PBS溶液与结构稳定剂室温100-150rpm震荡混匀5-15min；b将真皮基质置于上述步骤a配置的混合液中，2-8℃，低压浸泡20min-2h，低压压力为200-500Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；⑵脱细胞过程：a含有结构稳定剂的脱细胞溶液的配制：将脱细胞溶液与结构稳定剂室温80-200rpm震荡混匀15-30min；b将真皮基质置于上述⑵a配制的脱细胞混合液中，2-8℃，80-200rpm震荡处理4-6h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝5-10:1(w/v)；c将步骤⑵b处理后的真皮基质置于⑵a配制的脱细胞溶液中，2-4℃，超声高压处理30-60min，超声功率20-40Hz，压强为200-500MPa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；⑶等渗清洗：将真皮基质置于⑴a配制的含有结构稳定剂的PBS缓冲液中，2-8℃，80-150rpm震荡处理24-48h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝10-20:1(w/v)。2.根据权利要求1所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述的结构稳定剂为丝素蛋白、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、蔗糖中的两种或三种。3.根据权利要求2所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述结构稳定剂组分的质量浓度为：丝素蛋白：5％-20％甘露醇：1％-3％甘氨酸：0.5％-3％精氨酸：0.5％-3％蔗糖：1％-3％。4.根据权利要求1所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述的脱细胞试剂为酶类或表面活性剂。5.根据权利要求4所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述酶类脱细胞试剂为为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、无花果蛋白酶、磷脂酶A2、核酸酶、Dispase中的一种或多种。6.根据权利要求4所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述表面活性剂为TritonX-100、CHAPS、SDS、DCA中的两种或三种。7.根据权利要求6所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：表面活性剂浓度为0.01％-2％。2CN111437443A说明书1/4页一种新型真皮基质脱细胞方法技术领域[0001]本发明属于生物医用材料领域，涉及真皮基质脱细胞技术，尤其是一种新型真皮基质脱细胞方法。背景技术[0002]皮肤由表皮层、真皮层和皮下组织构成，真皮层是一层致密结缔组织，组成成分有胶原纤维、成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、血管等。胶原纤维主要是由Ⅰ型胶原蛋白构成，种属间差异很小，而外源细胞、组织液、核酸、脂质是引起免疫原性的因素。真皮基质作为外源组织植入人体时，需要去除细胞、核酸等上述因素才能避免出现免疫排斥反应。真皮基质可来自异体皮、猪皮、牛皮、羊皮等。[0003]目前常用的脱细胞方法有物理法(如搅拌、震荡、超声、低渗和高渗)、化学法(如酸、碱、表面活性剂)、酶法(如胰蛋白酶、DNase等)、有机溶剂(如乙醇、丙酮等)，这四种方法处理过程中都会造成真皮基质结构不同程度的损伤，降解基质中的活性因