多通道成像定量荧光免疫方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111521776A(43)申请公布日2020.08.11(21)申请号202010327942.6(22)申请日2020.04.23(71)申请人安徽华培生物科技有限公司地址230088安徽省合肥市高新区创新大道106号明珠产业园4＃厂房4层申请人浙江聚视信息技术有限公司(72)发明人范传华孙京海(74)专利代理机构北京兴智翔达知识产权代理有限公司11768代理人郭卫芹(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称多通道成像定量荧光免疫方法(57)摘要本发明公开了多通道成像定量荧光免疫方法，包括有检测装置及其检测方法：检测装置包括：数字相机和试剂卡，数字相机下端转动安装有镜头，镜头底部安装有滤色片，镜头底部转动安装有镜片固定架，镜片固定架底部设置有若干组LED激光灯；检测方法的步骤如下：步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体。步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条。步骤三、制备洗脱液：将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱。步骤四、荧光免疫观察。本发明通过多组结果的共同展示，从而可以成倍的提升免疫检测的效率，可以为后续的疾病治疗留出更多的时间，该方法快速、简单、灵敏，成本低，易于推广。CN111521776ACN111521776A权利要求书1/1页1.多通道成像定量荧光免疫方法的检测装置，其特征在于：所述检测装置包括：数字相机(1)和试剂卡(6)，所述数字相机(1)为仪器级数字相机，所述数字相机(1)下端转动安装有镜头(2)，所述镜头(2)底部安装有滤色片(3)，所述镜头(2)底部转动安装有镜片固定架(4)，所述镜片固定架(4)底部设置有若干组LED激光灯(5)。2.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述试剂卡(6)包括有侧视面板(61)，所述侧视面板(61)为塑料材质，所述侧视面板(61)左侧设置有加样区(62)，所述侧视面板(61)右侧设置有检测区(63)，所述检测区(63)等距离分布有若干组测试条(64)，所述加样区(62)中部设置有若干组加样口(67)。3.根据权利要求1所述的多通道成像定量荧光免疫检测装置，其特征在于：所述测试条(64)设置有检测线(65)和质控线(66)。4.多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述检查装置的检测方法的步骤如下：步骤一、荧光微球标记检测病毒抗体用活化液替换原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC进行活化，EDC是个可溶于水的碳二亚胺，在酰胺合成中用作羧基的活化试剂，也用于活化磷酸酯基团、蛋白质与核酸的交联和免疫偶连物的制取；称取一定量的EDC，溶解后加入微球溶液中旋转反应15min；去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次，2～8℃保存备用；步骤二、制备包被有抗检测病毒抗体的免疫层析试纸条将检测病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在试剂卡(6)，具体是涂抹在加样区(62)，37℃干燥箱干燥过夜；步骤三、制备洗脱液将需要检测的人体鼻咽部拭子取样进行洗脱，洗脱液包括：表面活性剂1mM～3mM；缓冲液10mM～1M；数字相机蛋白酶抑制剂3mM～10mM；步骤四、荧光免疫观察取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；每孔加入50-70ull质控品，置于荧光检测仪孵育仓；15min后，打开数字相机(1)自动检测。5.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤二中将涂抹样品后试机卡(6)荧光微球标记抗检测病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；加干燥剂于4～30℃密封保存。6.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤三中的表面活性剂为Tween镜头20，聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液和十二烷基磺酸钠按照5:3:1的比例均匀混合后得到；所述缓冲液为磷酸盐溶液，三羟甲基氨基甲烷溶液或碳酸盐溶液。7.根据权利要求4所述的多通道成像定量荧光免疫方法，其特征在于：所述步骤四中检测结果以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。2CN111521776A说明书1/5页多通道成像定量荧光免疫方法技术领域[0001]本发明涉及医疗荧光检测领域，特别涉及多通道成像定量荧光免疫方法。背景技术[0002]荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光