一种食物中红霉素残留检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111965176A(43)申请公布日2020.11.20(21)申请号202010818483.1G01N33/58(2006.01)(22)申请日2020.08.14G01N33/543(2006.01)(71)申请人深圳容金科技有限公司地址518000广东省深圳市宝安区航城街道三围社区航城智慧安防科技园A栋7层7777号(72)发明人邓兴朝陈欢童小倩林金昌曾祥富(74)专利代理机构深圳市深坪知识产权代理事务所(普通合伙)44586代理人李想(51)Int.Cl.G01N21/78(2006.01)G01N21/31(2006.01)G01N21/01(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称一种食物中红霉素残留检测方法(57)摘要本发明属于红霉素残留检测技术领域，公开了一种食物中红霉素残留检测方法，包括以下步骤：步骤一、红霉素试剂盒准备，采用96孔聚苯乙烯试剂板作为固相载体，放入真空铝箔袋内，在试剂盒酶标板微孔中预包被红霉素偶联抗原制成检测板，以塑料硬膜为盖板膜。本发明提供的红霉素残留检测试剂盒小巧轻便，便于携带和运输，且检测方法操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中红霉素含量的测定，减少了检验样本所需要的时间，可用于临床、药物、食品和环境等分析领域，且所需仪器较少，只需要酶标仪、匀质器、振荡器和微量加样器，普通实验室一般均有配备，所需成本较低。CN111965176ACN111965176A权利要求书1/2页1.一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、红霉素试剂盒准备：采用96孔聚苯乙烯试剂板作为固相载体，放入真空铝箔袋内，在试剂盒酶标板微孔中预包被红霉素偶联抗原制成检测板，以塑料硬膜为盖板膜，另外包含30mμL浓缩洗涤液、5mμL样品提取液A、样品提取液B、12mμL酶标二抗、6mμL红霉素抗体工作液、12mμL显色液TMB、12mμL终止液和6瓶1mμL不同浓度的红霉素标准品溶液及1瓶1mμL高浓度标准品溶液，试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在泡沫塑料模具中与检测板、盖板膜一同封装在盒内，以便于携带和运输；步骤二、1x洗液的制备：1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合检测：①加入50μL的标准液或样品于所设定的孔中；②在每孔中加入50μL酶标二抗，再在每孔中加50μL一抗体工作液；轻敲微孔板边缘混匀60秒；③室温(20-25℃)孵育30分钟；④洗板4次，每次加入260μL1×洗液，最后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；⑤加入100μL的TMB底物，轻轻震板1分钟。⑥在室温下避光孵育15分钟，加入50μL的终止液终止反应，在450nm下读OD值；步骤三、结果计算：①分别计算标准和样品的平均吸光度值和相对吸光度值；②相对吸光度值(％)＝(标准或样品吸光度值/零标准吸光度值)100％；③以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度的对数为横坐标建立标准曲线；④从标准曲线上读取样品的浓度值。2.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：步骤一所述试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项，准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用，准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中。3.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述样品在检测前需要进行前处理，所述样品包括水样、组织样本和鲜奶，所述水样为1×PBS：1体积(10×PBS)：9体积(蒸馏水)水样，所述组织样本包括鸡肉、鸭肉、猪肉、猪肝、鱼虾等。4.根据权利要求1所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应放置-20℃环境中，样品使用前恢复到室温。5.根据权利要求3所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述水样的前处理具体步骤为：①取2mμL水样，用酸或者碱调pH到6-7；②取1.0mμL上述调好的水样加入3mμL30％甲醇/70％1XPBS；③最大转速漩涡振荡1min；④每孔取50μL上清进行检测；稀释倍数：4。6.根据权利要求3所述的一种食物中红霉素残留检测方法，其特征在于：所述组织样本2CN111965176A权利要求书2/2页的前处理具体步骤为：①除去脂肪，匀质样品；②称取1g的样品，加入2.9mμL30％甲醇/70％1XPBS，加入50μL样品提取液A，摇匀5秒后加入50μL样品提取液B，涡旋30秒；③最大转速漩涡振荡3min；④室温(22.5±2.5)℃、4000rpm离心5分钟；⑤室温下4000xg离心4分钟；⑥每