冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111961142A(43)申请公布日2020.11.20(21)申请号202010801727.5(22)申请日2020.08.11(71)申请人陕西巨子生物技术有限公司地址710077陕西省西安市高新区锦业路69号创业研发园C区20号(72)发明人范代娣古娟段志广马晓轩(74)专利代理机构北京唐颂永信知识产权代理有限公司11755代理人刘伟(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)A61K31/715(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P1/16(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法(57)摘要本发明提供一种冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法，其包括下述步骤：将冠突散囊菌孢子破壁后进行干燥，研磨成粉末，按每1g菌丝加30‑50mL的水并混匀，于80℃‑100℃水提1‑4小时，然后抽滤取上清；对于所得的上清，加5‑10倍体积的95％的乙醇醇沉24‑48小时，于4‑8℃过滤沉淀后，在3000r/min条件下离心10min，弃上清液，取沉淀，得到冠突粗多糖；对于所得的冠突粗多糖，按每100mg冠突粗多糖加蒸馏水3‑5mL溶解，10000‑12000rpm离心10min，将上清液上样于C18色谱柱进行分离纯化，按保留时间由短至长依次收集冠突孢子多糖‑1、2、3、4。CN111961142ACN111961142A权利要求书1/1页1.一种冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法，其包括下述步骤：步骤A：将冠突散囊菌孢子破壁后进行干燥，研磨成粉末，按每1g菌丝加30-50mL的水并混匀，于80℃-100℃水提1-4小时，然后抽滤取上清；步骤B：对于步骤A所得的上清，加5-10倍(优选8倍)体积的95％的乙醇醇沉24-48小时，于4-8℃过滤沉淀后，在3000rpm条件下离心10min，弃上清液，取沉淀，得到冠突粗多糖；步骤C：对于步骤B所得的冠突粗多糖，按每100mg冠突粗多糖加蒸馏水3-5mL溶解，10000-12000rpm离心10min，将上清液上样于C18色谱柱进行分离纯化，按保留时间由短至长依次收集冠突孢子多糖-1，冠突孢子多糖-2，冠突孢子多糖-3和冠突孢子多糖-4，其中冠突孢子多糖-4即为所制备的冠突散囊菌孢子多糖组分。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤C中的C18色谱柱为ZORBXAEclipseXDB-C18(250mm×4.6mm，5μm，安捷伦公司产品)。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤C中的所述C18色谱柱进行分离纯化的条件为流速：1.0mL/min，进样体积：20μL，柱温：25℃。4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤C中收集的冠突孢子多糖-1的保留时间为3.712分钟，冠突孢子多糖-2的保留时间为4.887分钟，冠突孢子多糖-3的保留时间为7.352分钟，冠突孢子多糖-4的保留时间为12.178分钟。5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在所述步骤A之前还包括：步骤D：从冠突散囊菌菌落取菌，在PDA培养基上划线接种，28℃培养，待平板长满，用无菌水轻轻冲洗平板放入无菌管里，即为孢子种子；用涂布棒把孢子种子涂布到平板上，25-37℃下培养9-14天后，用无菌水冲洗平板收孢子，于-80℃冷冻3小时以上，在真空冷冻干燥机中冻干，得到冠突散囊菌孢子。6.一种冠突散囊菌孢子多糖组分，其是通过权利要求1～5中任一项所述的制备方法制备得到的。7.一种用于预防和/或治疗肝癌的药物组合物，其包含预防和/或治疗有效量的权利要求6所述的冠突散囊菌孢子多糖组分作为活性成分、以及药学上可接受的载体。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其不包含所述冠突散囊菌孢子多糖组分之外的其它用于预防和/或治疗肝癌的活性成分。9.根据权利要求6所述的冠突散囊菌孢子多糖组分在制备用于预防和/或治疗肝癌的药物组合物中的用途，其作为该药物组合物的活性成分。10.根据权利要求6所述的冠突散囊菌孢子多糖组分在制备用于预防和/或治疗肝癌的药物组合物中的用途，其中，所述冠突散囊菌孢子多糖组分是该药物组合物中唯一的用于预防和/或治疗肝癌的活性成分。2CN111961142A说明书1/5页冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物工艺学，具体涉及一种冠突散囊菌孢子多糖组分的制备方法，该冠突散囊菌孢子多糖组分可用于制备预防和/或治疗肝癌的药物。背景技术[0002]有研究报道，冠突散囊菌分泌多糖是一种很好的免疫调节剂，能够有效地激活免疫细胞，调节机体的免疫功能，同时也发现多糖具有抗肿瘤活性，以及降血脂、抗氧化的功效。冠突散囊菌子囊孢子有