一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111088300A(43)申请公布日2020.05.01(21)申请号202010120095.6(22)申请日2020.02.26(71)申请人闽南师范大学地址363000福建省漳州市芗城区县前直街36号(72)发明人张国广费鹏黄冰晴(51)Int.Cl.C12P17/10(2006.01)C12N1/14(2006.01)C09B67/54(2006.01)C09B61/00(2006.01)C12R1/645(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法(57)摘要本发明提供一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法，从茯砖茶中分离的高产黑色素的冠突散囊菌株发酵液除去菌丝体后，加入3mol/L盐酸使pH=3，低温下放置4h，黑色素分子自然沉淀出来，离心后收集存留在沉淀中的黑色素，用0.01mol/L的NaOH溶液溶解黑色素，再次加入3mol/L盐酸使pH=3，沉淀黑色素分子，通过3-5次的沉淀和复溶解过程，黑色素分子得到纯化，最后一次的沉淀用超纯水洗涤3~5次后，冷冻干燥使得黑色素分子彻底干燥。黑色素分子通过结构表征证实为真黑色素，进一步的动物实验表明冠突散囊菌的黑色素具有一定的降血脂的功效。CN111088300ACN111088300A权利要求书1/1页1.一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法，其特征在于：将从茯砖茶中中分离的高产黑色素冠突散囊菌菌株发酵液离心或过滤除去菌丝体，用盐酸调整pH至3.0，将黑色素从发酵液上清中沉淀出来，离心收集沉淀得到黑色素粗提物，再进一步纯化。2.根据权利要求1所述的一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法，其特征在于：具体方法为将冠突散囊菌接入液体培养基中，全温摇床中28℃，160r/min摇瓶发酵5天，可以观察到冠突散囊菌大量菌丝球的生长，将培养的菌丝球和培养基放置入4℃静置8h，然后再放入全温摇床培养5天，可以看到培养基明显呈现黑色；除去发酵液中菌丝体，将发酵液用3mol/L盐酸调整pH=3，低温下放置4h，黑色素分子自然沉淀出来，8000r/min离心10min后收集呈现黑色的沉淀，用0.01mol/L的NaOH溶液溶解黑色素，再次加入3mol/L盐酸使pH=3，沉淀黑色素分子，再次用0.01mol/L的NaOH溶液溶解黑色素沉淀，反复5次沉淀和溶解过程，使得黑色素分子得到纯化，最后一次的沉淀用超纯水洗涤3~5次后，冷冻干燥黑色素分子，得到黑色素。2CN111088300A说明书1/3页一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法技术领域[0001]本发明涉及微生物培养与发酵，具体是一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法。背景技术[0002]黑色素是目前应用最多最广的生物天然色素之一，黑色素主要是由多羟基酚、多羟基吲哚与吡咯氧化而成的构造不规则的化合物，在细胞中常与蛋白质等物质结合存在，微溶或难溶于水，不溶于酸溶液和常见有机溶剂，可溶于碱溶液。天然黑色素包括两大类，一类是酪氨酸、多酚化合物经生物代谢所得最终产物黑色素(melanin)；另外一大类为花苷类颜色较深的黑色素，主要分布于植物中。根据黑色素中氮、硫元素的含量，将黑色素分为真黑色素、异黑色素和棕黑色素三类。[0003]从不同生物分离到的黑色素均被报道具有较强的抗氧化、清除自由基等功效，且具有延缓衰老、舒气止胀、清热解毒、壮阳补肾、软化血管、抗肥胖、提高免疫力等功效，还可防治各种疾病，如高血压、心脏病、糖尿病、血管硬化、癌症及肝脏疾病等。传统的黑色素合成主要釆用酶法和化学法，但是由于原料以及酪氨酸酶价格昂贵，合成流程复杂，成本较高，不利于大规模工厂化生产。微生物来源的黑色素因为微生物的易培养、得率高等特点，逐渐被学者们挖掘，有许多学者利用细菌、霉菌或者真菌生产黑色素，考虑到菌种安全性，大多数菌株（如：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌等）生产的黑色素在食品中应用还有一些障碍。[0004]冠突散囊菌（Eurotiumcristatum）又名金花菌，是茯砖茶制作过程中，在特殊的温度、湿度等环境调节下，通过“发花”过程而生长起来的自然的有益的一种真菌。冠突散囊菌自从茯砖茶中分离出后，很多人对其毒性、生理生化活性和茶叶制作进行了研究。多种动物中开展的毒理学研究表明，金花菌属于无毒微生物，而且其发酵产物还具有很好的抗氧化、抑菌、调节肠道菌群平衡、提高免疫力、抗衰老和抗肿瘤等活性。在培养中发现冠突散囊菌在液体发酵中经过适当处理能产生较高产量的黑色素，该黑色素分子结构与一些大型真菌如黑木耳中黑色素的结构基本一致，且具有很强的抗氧化和降血脂的功能。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种冠突散囊菌黑色素发酵制备方法。[0006]通过从茯砖茶中分离出的优质