山银花多糖提取工艺参数优化.docx

山银花多糖提取工艺参数优化摘要：采用苯酚-硫酸法测定山银花（Lonicerahypoglauca）多糖的含量并对提取工艺进行优化。在单因素试验的基础上采用L9（34）正交试验以山银花多糖提取率为指标探讨了提取次数、提取温度、提取时间、料液比对山银花多糖提取率的影响。结果表明最佳提取工艺参数为提取4次、提取温度80℃、提取时间150min、料液比1∶20（g∶mL）。在此条件下山银花中多糖平均提取率为15.39%加样回收率为97.70%该方法提取山银花多糖操作简便、准确度高、重现性好可作为山银花多糖提取和含量测定的方法。关键词：山银花（Lonicerahypoglauca）；多糖；苯酚-硫酸法；正交试验中图分类号：S567.1+9；R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2015）10-2466-04DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.10.043山银花（Lonicerahypoglauca）别名大银花、金因花（哈尼族名）、棒早瓜（苗族名）为忍冬科菰腺忍冬干燥的花蕾或带初开的花[1]。它味甘、性寒是临床中常用中药药用价值很高具有清热解毒、疏散风热的功效常用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等。山银花在中国资源丰富分布于全国各省它具有抗病原微生物、抗炎、抗氧化、保肝、抗肿瘤、免疫调节与抗动脉粥样硬化等方面的活性在民间使用较为广泛是多种中成药的主要原料。近年来山银花还被广泛应用于食品、饮料、保健品、化妆品和兽医用等方面。据文献报道山银花的化学成分主要有挥发油类、黄酮类、有机酸类和苷类等[2]。多糖（Polysaccharide）是由许多相同或不同的单糖以糖苷键聚合而成的高分子化合物它是自然界中储量丰富的生物聚合物主要包括植物多糖、动物多糖以及微生物多糖3类[3]。植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗衰老、抗疲劳以及抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等[4-8]多种生物活性及药理作用很可能是山银花免疫调节和抗癌抗肿瘤的有效成分之一。目前有关山银花多糖含量测定及提取工艺研究尚未见报道。试验采用水提醇沉法对山银花中多糖进行提取通过有关显色反应对提取物进行定性鉴定用苯酚-硫酸法测定其多糖含量通过正交试验对提取工艺进行了优化旨在为山银花的药学价值研究提供参考并为其进一步开发利用提供基础数据。1材料与方法1.1材料与仪器山银花采自云南省双柏县衰牢山经鉴定为忍冬科植物；葡萄糖标准品（≥98%）、石油醚（沸程30～60℃）、三氯乙酸、95%乙醇、苯酚、蒽酮、α-萘酚、浓硫酸等均为分析纯。722S型分光光度计（上海青华科技仪器有限公司）、HH-S2s型恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂）、电子天平（奥豪斯仪器）、12B5型台秤（成都天平仪器厂）、SHZ-ⅢA型循环水真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）、远红外快速恒温干燥箱（鄄城威瑞科教仪器有限公司）。1.2试验方法1.2.1试验材料处理样品依次用自来水、去离子水洗净风干后放入远红外快速恒温（55℃）干燥箱中烘干粉碎后过40目筛得山银花干粉。将山银花干粉用折叠成筒状的滤纸装好置于索式提取器中加入石油醚冷浸48h然后置于75℃水浴中使其微沸回流反复提取直至提取液澄清为止取出冷却至室温。用减压抽滤滤渣用石油醚充分洗涤后风干至石油醚全部挥发得到去除色素和油脂的山银花烘干后密封保存备用。1.2.2山银花多糖的提取准确称取去除色素和油脂的山银花干粉5.00g置于250mL烧杯中加入125mL去离子水置于80℃恒温水浴锅中加热120min后。减压抽滤浓缩滤液往滤液中加入等体积的3%三氯乙酸除去山银花中的蛋白质摇匀、静置过夜离心除去沉淀再往滤液中加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖静置24h将醇沉后的白色絮状物进行离心得山银花多糖粗提物用去离子水溶解多糖粗提物得供试品溶液备用。1.2.3山银花多糖的鉴定取2mL供试品溶液3份分别加质量分数为5%苯酚溶液1mL和硫酸溶液2mL浓度为2g/mL蒽酮-硫酸溶液4mL质量分数为0.5%α-萘酚溶液1mL和浓硫酸溶液2mL进行显色反应观察试验现象检验有无多糖[910]。1.2.4山银花多糖含量测定1）葡萄糖标准溶液的制备。准确称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品100.00mg用去离子水溶解摇匀并定容至100mL容量瓶中得浓度为1.00mg/mL的葡萄糖标准溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3