用正交试验法优化金银花多糖提取工艺.doc

GAOJIAOLUNTAN
高教论坛
GAOJIAOLUNTAN
高教论坛
PAGE-130-

PAGE-129-

用正交试验法优化金银花多糖提取工艺
邓庆华黄振艳佟进
（呼伦贝尔学院生命科学与化学学院内蒙古海拉尔区021008）

摘要：采用传统的多糖提取方法。根据单因素实验，确定了正交试验的因素和水平，并通过正交试验，比较了影响多糖含量的主要因素的主次关系，优化了提取条件，确定了最佳的提取工艺。并用苯酚-硫酸法测定了金银花粗多糖样品中糖的含量，通过气相色谱法测定了待测样品中的单糖组成。本文以金银花粗多糖为研究对象，目的在于探索其未被发现的多糖及其所具有的生物活性，为进一步开发利用提供基础资料。
关键词：金银花多糖最佳条件提取

1实验材料与仪器
1.1材料
浓硫酸、6%苯酚、分析纯葡萄糖、洗脱液、葡聚糖标准样、金银花等。
1.2仪器
752型紫外分光光度计、恒流泵、水浴锅、电热恒温鼓风干燥箱、分析天平、紫外检测仪等。
2实验部分
2.1金银花水溶性粗多糖水提醇沉工艺

投稿日期：2009-10-27
作者简介：邓庆华（1978—）女，汉族，硕士，讲师，主要从事生理学与生物化学研究。

金银花样品用自来水冲洗，烘干制恒重，以水作为溶剂，采用不同的提取温度、料液比、提取时间、提取次数进行实验。水提液用纱布过滤。将滤液浓缩纯沉过夜。沉淀离心，离心后脱水，沉淀用P2O5真空干燥过夜，即得粗多糖EP。
2.2金银花水溶性粗多糖提取工艺条件的选择
2.2.1提取时间对多糖含量的影响
在确定料液比为1：10，提取温度为80℃的条件下，样品浸提一次，分别以30min、45min、60min、90min、120min进行实验。
2.2.2提取温度对多糖含量的影响
分别在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个温度下，料液比为1：10，提取时间为90min，在不同温度下，样品浸提一次，根据多糖浸出量来选择最佳提取温度。
2.2.3料液比对多糖含量的影响
在上述实验确定的提取时间90min、提取温度为80℃条件下，分别以1：10、1：20、1：30、1：40、1：50的料液比进行实验。
2.2.4浸提次数对多糖含量的影响
在上述实验确定的提取时间为90min、提取温度为80℃、料液比1：30，对样品选择不同的浸提次数，根据多糖浸出量确定最佳浸提次数。
2.3多糖含量的测定方法：采用苯酚-硫酸法
2.3.1以葡萄糖为标准样制定标准曲线：
精密称取105℃干燥恒重的无水葡萄糖100mg于1000ml容量瓶中加蒸馏水定容。分别精取0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml标准溶液于大试管中，补加蒸馏水至1.0ml，以1.0ml蒸馏水为空白，分别加6%苯酚0.5ml，浓H2SO42.5ml，立即摇匀，室温放置20分钟以后于490nm测定密度，以横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，绘出葡萄糖毫克数与OD值之间的标准曲线，并计算标准曲线的回归方程。
2.3.2样品多糖含量的测定：
称取最佳条件下提取的金银花粗多糖样品50mg，定容至500ml，然后取干燥洁净试管，将样品溶液、6%苯酚溶液、浓硫酸一次按1.0ml∶0.5ml∶2.5ml的比例加入，混匀，每个样品平行做三管，在冷却20分钟后，静止，蒸馏水坐对照，然后在490nm下比色，所得数值取平均值，对照标准曲线可得单寡糖与多糖含量。
3结果与讨论
3.1提取工艺条件的讨论
3.1.1浸提时间对多糖含量的影响
表1浸提时间对多糖含量的影响
时间
（min）30456090120多糖含量
（%）1.276.614.621.421.67讨论：由图1可见，多糖含量随时间的延长而增加，但90min之后增加不大。所以确定最佳的提取时间为90min。
3.1.2提取温度对多糖含量的影响
表2提取温度对多糖含量的影响
温度（℃）5060708090多糖含量（%）4.276.879.7320.821
讨论：由图2可以看出，多糖含量随温度的升高而增加，70℃-90℃为较理想的提取温度。在80℃后所得多糖含量基本不变，所以选定80℃为最佳提取温度。

3.1.3料液比对多糖含量的影响
表3料液比对多糖含量的影响
料液比1：101：201：301：401：50
多糖含量（%）6.477.0713.3314.0717

讨论：由图3可见，随着料液比的增加多糖含量呈上升的趋势，但料液比在1：30后，多糖含量基本不变，因此选择1：30为最佳料液比。
3.1.4浸提次数对多糖含量的影响
表4浸提次数对多糖含量的影响
浸提次数1234多糖含量（%）710.21313.53

讨论：由图4可见，随浸提次数的增加，多糖的含量逐渐增大，在浸提3次后，多糖