一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112280744A(43)申请公布日2021.01.29(21)申请号202011152452.3(51)Int.Cl.(22)申请日2020.10.26C12N5/20(2006.01)C07K16/44(2006.01)(83)生物保藏信息C07K14/795(2006.01)CGMCCNo.191732019.11.28C07D239/91(2006.01)(71)申请人江南大学G01N33/577(2006.01)地址214122江苏省无锡市滨湖区蠡湖大C12R1/91(2006.01)道1800号江南大学食品学院生物界面与生物检测研究所(72)发明人胥传来路倩倩匡华徐丽广孙茂忠刘丽强宋珊珊吴晓玲郝昌龙胡拥明(74)专利代理机构无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)32104代理人时旭丹张仕婷权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用(57)摘要一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株TZ1B1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCCNo.19173。利用该菌株分泌获得的安眠酮单克隆抗体用于进行食品安全检测中安眠酮残留的分析检测。本发明获得的安眠酮单克隆抗体细胞株可以用于免疫分析检测，其对安眠酮有较好的检测灵敏度和特异性（IC50值为0.96ng/mL）、对安眠酮类似物交叉率小于10%，交叉率=（安眠酮的IC50/类似物的IC50）×100%。CN112280744ACN112280744A权利要求书1/1页1.一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株TZ1B1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCCNo.19173。2.安眠酮单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCCNo.19173的杂交瘤细胞株TZ1B1分泌产生。3.一种安眠酮半抗原，其特征在于：其简称为MTQ-COOH，分子式如下：。4.一种安眠酮完全抗原，其特征在于：筒称为MTQ-COOH-KLH，分子式如下：。5.权利要求4所述安眠酮完全抗原的制备方法，其特征在于步骤如下：将权利要求3所述安眠酮半抗原MTQ-COOH、N-羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于无水N，N-二甲基甲酰胺DMF中，搅拌进行反应，得到安眠酮半抗原MTQ-COOH溶液；将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于无水DMF后，加入到MTQ-COOH溶液中，搅拌进行反应，得到A液；将钥孔血蓝蛋白KLH用碳酸盐缓冲溶液CBS稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用磷酸盐缓冲液PBS透析反应液，得到完全抗原MTQ-COOH-KLH。6.权利要求2所述安眠酮单克隆抗体的应用，其特征在于：将其应用于食品安全检测中安眠酮残留的分析检测。2CN112280744A说明书1/7页一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用技术领域[0001]本发明涉及一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。背景技术[0002]安眠酮(Methaqualone)又名海米那，甲奎酮或眠可欣，属于非巴比妥类中枢神经镇定药，在临床上用于神经衰弱、失眠、麻醉前给药，常做为镇静和催眠药物。长期使用安眠酮会形成依赖性，造成毒物癖；大剂量服用会引起中毒，已属国家管制类的精神药品。2007年，农业部明确规定安眠酮在动物性食品中的残留为零。但由于安眠酮生产工艺简单，随着畜牧养殖业的迅速发展，安眠酮仍被非法用于畜禽养殖，造成了动物性食品的不安全。[0003]对于安眠酮兽药残留的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对安眠酮的高效、快速的检测方法。[0004]酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在兽药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测安眠酮的前提是得到对安眠酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对安眠酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。发明内容[0005]本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株分泌安眠酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。此杂交瘤细胞株分泌