一种氯硝西泮全抗原及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112961235A(43)申请公布日2021.06.15(21)申请号202110213669.9(22)申请日2021.02.25(71)申请人杭州隆基生物技术有限公司地址311100浙江省杭州市余杭区余杭街道义创路1号(72)发明人曾繁荣郑曙剑(74)专利代理机构杭州杭诚专利事务所有限公司33109代理人尉伟敏(51)Int.Cl.C07K14/765(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/47(2006.01)C07K1/107(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种氯硝西泮全抗原及其制备方法(57)摘要本发明涉及全抗原合成技术领域，公开了一种氯硝西泮全抗原及其制备方法。过该氯硝西泮全抗原的制备方法包括以下步骤：（1）用氰基硼氢化钠对氯硝西泮中的亚胺基进行还原，获得4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂䓬‑2(3H)酮；（2）将4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂䓬‑2(3H)酮与丁二酸酐进行反应，获得氯硝西泮半抗原；（3）将氯硝西泮半抗原与载体蛋白偶联后，获得氯硝西泮全抗原。本发明实现了氯硝西泮与载体蛋白的偶联，且获得的氯硝西泮全抗原较为完整地保留了氯硝西泮分子结构，故具有较高的特异性和灵敏度。CN112961235ACN112961235A权利要求书1/2页1.一种氯硝西泮全抗原，其特征在于，其结构式为：其中，R为载体蛋白。2.如权利要求1所述的氯硝西泮全抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、血蓝蛋白、鸡卵白蛋白、牛丙种球蛋白中的一种或多种。3.一种如权利要求1或2所述氯硝西泮全抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用氰基硼氢化钠对氯硝西泮中的亚胺基进行还原，获得4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂‑2(3H)酮；(2)将4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂‑2(3H)酮与丁二酸酐进行反应，获得氯硝西泮半抗原；(3)将氯硝西泮半抗原与载体蛋白偶联后，获得氯硝西泮全抗原。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氯硝西泮由氯硝西泮片提取获得，具体过程如下：将氯硝西泮片捣碎后，加入乙酸乙酯进行超声处理，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液减压浓缩，获得氯硝西泮。5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的具体过程如下：将氯硝西泮溶于乙醇，加入冰乙酸，再加入氰基硼氢化钠，在20‑30℃下反应12‑18h后，分离产物，获得4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂‑2(3H)酮。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述氯硝西泮与氰基硼氢化钠的质量比为1:0.3‑0.5；和/或步骤(1)中，所述氯硝西泮与冰乙酸的质量比为1:0.5‑1。7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体过程如下：将4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂‑2(3H)酮溶于吡啶，加入丁二酸酐，在100‑110℃下反应12‑18h后，分离产物，获得氯硝西泮半抗原。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述4,5‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑1H‑l,4‑苯并二氮杂‑2(3H)酮与丁二酸酐的质量比为1:0.8‑1.2。9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)的具体过程如下：将氯硝西泮半抗原溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，加入N‑羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺，在10‑30℃下反应15‑24h，离心后取清液，加入到载体蛋白的PBS溶液中，在4‑20℃下反应15‑24h，分离产物，获得氯硝西泮全抗原。10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述氯硝西泮半抗原、N‑羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺的质量比为2CN112961235A权利要求书2/2页1:0.27‑0.30:0.49‑0.52；和/或步骤(3)中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白，所述氯硝西泮半抗原与牛血清白蛋白的质量比为1:1.5‑2.5。3CN112961235A说明书1/8页一种氯硝西泮全抗原及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及全抗原合成技术领域，尤其涉及一种氯硝西泮全抗原及其制备方法。背景技术[0002]氯硝西泮(Clonazepam)又名氯安定，学名“1,3‑二氢‑7‑硝基‑5‑(2‑氯苯基)‑2H‑l,4‑苯并二氮杂‑2酮”，其结构式如下式：氯硝西泮，为一种高效苯二氮类镇定剂。临床上主要用于治疗癫痫、惊厥