五味消毒饮的指纹图谱检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113049700A(43)申请公布日2021.06.29(21)申请号202110290912.7(22)申请日2021.03.18(71)申请人江苏弘典中药产业研究院有限公司地址210042江苏省南京市玄武区徐庄路6号4幢申请人南京中山制药有限公司(72)发明人郑艳萍成俊刁和芳赵开军彭雲徐董欣王海丽(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人陆志斌(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/86(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称五味消毒饮的指纹图谱检测方法(57)摘要本发明公开了五味消毒饮的指纹图谱检测方法，五味消毒饮建立包括以下步骤：步骤1、五味消毒饮供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备；步骤3、线性关系考察；步骤4分别精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤5，将步骤4中获得的五味消毒饮供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A，生成五味消毒饮特征指纹图谱；并通过比对各峰与混合对照品色谱峰保留时间，对五味消毒饮特征指纹图谱进行归属。本发明所提供的五味消毒饮，能全面，客观地表征五味消毒饮的质量。本发明提供的指纹图谱的检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。CN113049700ACN113049700A权利要求书1/2页1.一种五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、供试品溶液的制备取不同批次的金银花、野菊花、蒲公英、紫花地丁和天葵子，加水浸泡后加热煎煮提取1~3次，过滤，合并药液，减压浓缩，过微孔滤膜，取续滤液，即得；步骤2、混合对照品溶液的制备精密称取绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和蒙花苷对照品适量，加甲醇配制成混合对照品溶液；步骤3、线性关系考察分别精密称取绿原酸和蒙花苷对照品至容量瓶，加甲醇溶解定容至刻度，然后分别取绿原酸对照品储备液用甲醇稀释至五个梯度浓度，取蒙花苷对照品储备液以甲醇稀释至五个梯度浓度，然后分别注入高效液相色谱仪测定峰面积，以标准品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程：步骤4、精密吸取步骤1的供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤5、将步骤4中获得的不同批次的五味消毒饮供试品溶液的指纹图谱导出，将其导入“中药指纹图谱相似度评价系统2012版，生成五味消毒饮特征指纹图谱；步骤6、取步骤2制备得到的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，通过比对各峰与混合对照品色谱峰保留时间，对五味消毒饮特征指纹图谱进行归属；步骤7、根据步骤3建立的绿原酸和蒙花苷对照品回归方程，计算不同批次供试品溶液中绿原酸和蒙花苷的含量。2.根据权利要求1所述的五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1：供试品溶液制备方法为：取金银花150g、野菊花60g、蒲公英60g、紫花地丁60g和天葵子60g，加4.5L水，浸泡20min，加热至沸，沸腾20min后过滤，药渣加4L水，加热至沸，沸腾20min后过滤，合并药液，减压浓缩至含生药1.0g·mL‑1；量取浓缩液1mL，加入1mL水，混匀，用80%甲醇定容至50mL，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。3.根据权利要求1所述的五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤2混合对照品溶液的制备方法为：精密称取绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、蒙花苷对照品适量，加体积浓度80%甲醇配制成浓度分别为32μg·mL‑1、19.68μg·mL‑1、10.7μg·mL‑1、17.28μg·mL‑1的对照品溶液。4.根据权利要求1所述的五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，五味消毒饮特征指纹图谱中共有13个共有峰，其中3、6、9、13号峰分别为绿原酸、咖啡酸、木犀草苷和蒙花苷。5.根据权利要求1所述的五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3中，液相色谱条件为：色谱柱：YMC‑PackODS‑A柱，规格250×4.6mm，5μm；流动相：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液，洗脱梯度：0~20min，90%~80%B；20~40min，80%~75%B；40~52min，75%~70%B；52~52.01min，70%~90%B；52.01~60min，90%B；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长330nm；进样量20μL。6.根据权利要求1所述的五味消毒饮的指纹图谱检测方法，其特征在于，五味消毒饮特征指纹图谱中1号峰、3号峰、4号峰、9号峰、10号峰、11号峰、12号峰主要来源于金银花，次要来源于野菊花；2号峰单独来源于蒲公英；5号峰和7号峰单独来源于紫花地丁；6号峰来源于