抗CD123人源化单链抗体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113416251A(43)申请公布日2021.09.21(21)申请号202110682589.8A61K39/395(2006.01)(22)申请日2018.09.26A61K35/17(2015.01)A61P35/02(2006.01)(62)分案原申请数据201811125919.82018.09.26(71)申请人重庆精准生物技术有限公司地址400038重庆市九龙坡区含谷镇含兴路38号(72)发明人张巍陈军单娟娟赵文旭徐艳敏黄霞赵永春张茜真(74)专利代理机构北京元本知识产权代理事务所(普通合伙)11308代理人黎昌莉(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)权利要求书1页说明书7页C12N15/13(2006.01)序列表13页附图3页(54)发明名称抗CD123人源化单链抗体及其应用(57)摘要本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗CD123人源化单链抗体及其应用。本发明的识别CD123抗原的单链抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNO:1，SEQIDNO:3，SEQIDNO:5，SEQIDNO:7所示，所述单链抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNO:2，SEQIDNO:4，SEQIDNO:6,SEQIDNO:8所示。本发明提供了稳定适合的抗CD123人源化单链抗体(scFv)，其用于制备CAR结构，既保留了scFv的结合特异性和亲和力，又保证了CAR‑T在体内的的稳定性和安全性。在免疫细胞中表达后，不仅可以有效的清除表达CD123抗原的肿瘤靶细胞，而对阴性抗原(不表达CD123)的肿瘤细胞没有毒性作用；并且能够维持靶向CD123的CAR在病人细胞培养过程中的阳性率，在靶抗原刺激后能够长时间的进行增殖，能够用于肿瘤的靶向治疗。CN113416251ACN113416251A权利要求书1/1页1.识别CD123抗原的人源化单链抗体，其特征在于，所述单链抗体氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。2.核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码权利要求1所述的识别CD123抗原的单链抗体。3.权利要求2所述的核苷酸序列在用于制备抗CD123抗原的多肽的应用。4.表达权利要求1所述抗体的重组载体。5.权利要求4所述的重组载体感染的细胞。6.权利要求5所述的细胞在用于制备治疗恶性血液病的药物中的应用，其特征在于，所述恶性血液病的细胞或组织能够表达CD123。7.权利要求1所述的单链抗体在用于制备治疗恶性血液病的药物中的应用，其特征在于，所述的恶性血液病的细胞能够表达CD123。8.一种治疗恶性血液病的药物，其特征在于，所述的药物包含权利要求1所述的单链抗体以及药学上可接受的载体。9.权利要求1所述的单链抗体在制备精准捕获能够表达CD123恶性血液病细胞的载体中的应用。10.权利要求1所述的单链抗体在制备CAR‑T骨架中的抗原识别域的应用。2CN113416251A说明书1/7页抗CD123人源化单链抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程领域，具体涉及一种抗CD123人源化单链抗体及其应用。背景技术[0002]CD123又称白介素3受体α链(IL‑3Rα)高表达于白血病干细胞或白血病幼稚细胞，在正常造血干细胞不表达或者低表达，是白血病相关抗原也是急性髓性白血病的特异性抗原。急性髓性白血病(Acutemyeloidleukemia，AML)是髓系造血干/祖细胞恶性疾病，以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命；常规的诱导化疗虽然能够缓解AML但是最终并不能阻止AML的复发以及复发患者高的死亡率。然而AML的常规治疗已经50年未有改变，急需寻找新的改变。[0003]CD123靶标的出现是AML治疗的新突破；由于CD123在AML高表达，理论上以CD123为靶标的免疫治疗具有更安全有效的治疗效果，国外也已经在进行以CD123为靶标的靶向药物的临床试验，但是功效均很有限并且仍有安全性问题的发生；因此筛选适合的靶向CD123的单链抗体是很有必要的。[0004]单链抗体作为嵌合抗原受体(CAR)结构中重要的组成部分，其选择对CAR‑T疗效起到至关重要的作用，目前用于治疗AML的CAR‑T研究相对较少，CAR的稳定性和安全性仍需进一步改造研究，因此，筛选适合于组合CAR的靶向CD123的单链抗体也很有必要。[0005]传统的鼠源抗体，因为鼠抗的异质性会引起人抗鼠抗体反应(Humananti‑mouseantibodyreaction，HAMA)，不管是单独应用，还是组合作为CAR的抗原识别区应用，均会在循环系统中被很快清除，失去疗效。因此，治疗用鼠源单抗需要进行人源化修饰以提高